果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察

果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察 一.实验目的

通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。

二.实验原理

唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。

三.实验用品

1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水

2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI

四.实验方法和步骤

1. 幼虫的培养

为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。

A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置

的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。

B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～

20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。

2. 剖取唾腺

用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。果蝇的唾腺是单层细胞构成的，因此在解剖镜下可以看出其细胞界限。如果唾腺没有被拉出来，可用解剖针轻压虫体的断开处，把唾腺挤压出来。操作时解剖针一定要轻轻拨动，切不可将肠管、神经管等全部截断从而影响视线。由于果蝇唾腺几乎透明，但是其上连带的脂肪体为乳白色，因此还是容易辨认出来的。

3. 去除脂肪体

果蝇的唾腺上附有乳白色的脂肪体，如不去除，在制片时会在载片上形成大

量脂肪滴，从而影响制片的质量。在去除脂肪体时，用解剖针的针尖轻轻操作，尽量保持唾腺的完整性。如果在剥离脂肪时将唾腺碰断，仍然可以继续进行染色操作，因为在唾腺内有大量的细胞。

4. 酸解

用解剖针将载片上的杂物全部去除，只留下唾腺。如果唾腺周围还有许多水分，应用吸水纸小心将水分洗净，注意要在解剖镜下操作，并要避免将剥离好的唾腺用纸吸走。用HCI酸解10min，再用蒸馏水洗2次。

5. 染色及压片

加一滴改良苯酚品红染液染色10～15min。盖上盖玻片并覆盖一层吸水纸，用左手稳住载玻片，防止载玻片与盖玻片滑动，右手持解剖针，用针柄敲击盖片。用力要合适，将唾腺细胞压破，使染色体伸展开但又没造成染色体的断裂或重叠为最好。

6. 镜检观察

五.实验结果 见下图

六.注意事项

1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2.将脂肪组织清除干净。

3.染色时间不可过长，否则背景也着色。 4.压片时要揉。

5.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。 8.吸水时勿将唾腺一起吸走