[12]发明专利申请公布说明书
[21]申请号200510045429.3
[51]Int.CI.
A61K 31/192 (2006.01)A61K 9/08 (2006.01)A61K 9/10 (2006.01)A61K 9/14 (2006.01)
[43]公开日2007年6月13日[22]申请日2005.11.29[21]申请号200510045429.3
[71]申请人山东绿叶天然药物研究开发有限公
司
地址264003山东省烟台市莱山区宝源路9号[72]发明人蒋王林 曲桂武 岳喜典 侯建
[11]公开号CN 1977834A
A61K 9/20 (2006.01)A61K 9/48 (2006.01)A61P 13/12 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 9 页
[54]发明名称
迷迭香酸的新用途
[57]摘要
本发明提供一种迷迭香酸的新用途，具体涉及迷迭香酸在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的用途。
200510045429.3
权 利 要 求 书
第1/1页
1.迷迭香酸在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 2.迷迭香酸在制备治疗或预防急性肾功能衰竭的药物中的应用。 3.迷迭香酸在制备治疗或预防慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 4.以迷迭香酸为活性成分的用于治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物组合物。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，可以以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、糖浆或口服液的形式存在。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，注射制剂优选为粉针剂，口服制剂优选为片剂、胶囊。
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200510045429.3
说 明 书
迷迭香酸的新用途
第1/9页
技术领域
本发明涉及迷迭香酸在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 背景技术
迷迭香酸(Rosmarinic acid)的化学名为R(+)2-〔〔3-(3，4-二羟基苯基-(-氧化-2-丙烯基)氧基)3，4-二羟基苯丙酸〕，是一种水溶性的多酚类化合物，具有抗炎、抗氧化活性、免疫抑制、抗血栓和抗血小板聚集作用等多种活性[刘鹰翔，计志忠，迷迭香酸药理作用的研究进展，国外医药·植物分册，1993，8(6)：248～251；陈淑珍，付阳平，等，迷迭香酸对大鼠中性粒细胞自由基生成和溶酶体释放的影响，药学学报，1999，34(12)：881～885；Peake P.W. PussellB.A，MartynP，etal.The，inhibiton effect of Rosmarinic acid on complement in volves the C5convertase.Int J Immuno pharmacol 13：853～857，1997；邹正午，徐理纳，田金英，迷迭香酸抗血栓和血小板聚集作用，药学学报，1993，28(4)：241～2451。但迷迭香酸治疗或预防肾衰的药理作用未见报道，基于此，本发明人通过大量的实验研究，提供了迷迭香酸在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 发明内容：
本发明提供了迷迭香酸在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 本发明提供了迷迭香酸在制备治疗或预防急性肾功能衰竭的药物中的应用。 本发明提供了迷迭香酸在制备治疗或预防慢性肾功能衰竭的药物中的应用。 本发明提供的迷迭香酸在用于预防或治疗急慢性肾功能衰竭时可以单独使用或以药物组合物形式使用。药物组合物包括作为活性成分的迷迭香酸和药学上可接受的载体。该药物组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉或静脉途径给药。药物组合物可以以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、糖浆或口服液的形式存在，注射用制剂优选粉针剂，口服制剂优选片剂、胶囊。本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。 本发明提供的迷迭香酸在用于上述任一用途时，其注射使用剂量范围是50mg～1000mg，优选50～500mg；口服使用剂量范围是100mg～2000mg，优选100～1000mg。
迷迭香酸可以从丹参、紫苏草、冬凌草、夏枯草等中提取得到，优选从丹参和紫苏草中提取。
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从丹参或紫苏草中提取迷迭香酸的方法为：将丹参或紫苏草叶以适量水浸泡或渗漉，过滤水提液，取滤液上聚酰胺树脂柱，用25～35％乙醇洗脱5～15个柱体积后用60％乙醇洗脱并收集这部分洗脱液，真空减压脱醇并浓缩，冻干或喷雾干燥，即得。
本发明人进行了下列试验来证实迷迭香酸为活性成分的药物在治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用，下面的实施例用于更详细的说明本发明，但并不意味着本发明仅限与此。
具体实施实例： 实施例1迷迭香酸的制备
取干燥丹参药材100Kg，粉碎至最粗粉，加适量水浸泡过夜后连同浸泡液装柱，再用15倍量水渗漉。渗漉液按0.1mg迷迭香酸/1ml聚酰胺的比例上样于处理好的聚酰胺柱，然后以25％乙醇洗15个柱体积洗去大部分杂质后用60％乙醇洗脱6个柱体积。收集60％乙醇洗脱出的流出液，70℃减压浓缩，得到迷迭香酸含量为96.48％的样品366.9g。 实施例2迷迭香酸的制备
取干燥丹参药材100Kg，粉碎至最粗粉，加适量水煎煮两次，第一次水用量2000L，第二次水用量1000L，合并水提液，过滤，滤液按0.1mg迷迭香酸/1ml聚酰胺的比例上样于处理好的聚酰胺柱，然后以35％乙醇洗10个柱体积洗去大部分杂质后用60％乙醇洗脱6个柱体积。收集60％乙醇洗脱出的流出液，70℃减压浓缩，喷雾干燥，得到迷迭香酸含量为96.32％的样品372.3g。
实施例3迷迭香酸冻干粉针制备
取迷迭香酸50.0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH调pH＝5.5～7.5，加甘露醇8g，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按冻干粉针工艺冻干，制成每支含迷迭香酸50.0mg的冻干粉针。 实施例4迷迭香酸片剂制备 处方：迷迭香酸 100.0g 糖粉 35.0g 乳糖 40.0g 羧甲基淀粉钠 23.0g 3％PVPK30水溶液 适量 硬脂酸镁 2.0g 共制成 1000片
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操作：称取处方量的迷迭香酸、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目筛，加入3％PVPK30水溶液适量制软材，20目筛制粒，60℃干燥3小时，18目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀后浅凹冲压片，调节片重约200mg，即得。 试验例1迷迭香酸对大鼠急性肾衰的影响 1.1药品与试剂
迷迭香酸：按制备例1制备；
甲强龙：比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706； 肌酐和尿素氮试剂盒：北京中生科技公司，批号：050606；
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。 1.2试验方法与结果
大鼠130只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，即正常组，模型组，甲强龙(12mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射小剂量(2mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，迷迭香酸灌胃剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3，迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4。甘油配成50％(V/V)，除正常组外，给大鼠禁水，16h后一次性肌注，剂量为1mL/100g，各组连续给药3天，从眼眶取血，测定血清肌酐和尿素氮(肌酐和尿素氮试剂盒测定肌酐和尿素氮)。
从表1结果可以看出，迷迭香酸静脉注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸灌胃剂量(10mg/kg)组1降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.05)；甲强龙(12mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3，迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.01)；迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著性差异。
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表1迷迭香酸对大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮的影响 组别正常组模型组甲强龙组
剂量(mg/kg)-----12251025501001050100200
血清肌酐(mg/dL)0.50±0.052.03±0.23
**
1.15±0.131.90±0.221.80±0.18
**
1.52±0.371.32±0.28
**
1.20±0.22
**
1.19±0.39
*
1.82±0.19
**
1.67±0.281.53±0.281.50±0.26
*****
说 明 书 第4/9页
血清尿素氮(mg/dL)10.25±2.7840.47±4.55
**
17.21±3.2538.05±3.3835.85±3.60
**
30.32±7.3626.52±4.19
**
21.85±3.45
**
21.55±5.88
**
36.27±3.85
**
31.25±5.6028.56±3.9527.76±5.80
*****
迷迭香酸静脉注射组
****
迷迭香酸灌胃组
，p＜0.05，，p＜0.01，与模型组比较
试验例2迷迭香酸对腺嘌呤导致大鼠慢性肾衰的影响 2.1药品与试剂
迷迭香酸：按制备例1制备； 腺嘌呤：常州华通化工公司；
甲强龙：比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706； 肌酐和尿素氮试剂盒：北京中生科技公司，批号：050606；
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。 2.2试验方法与结果
大鼠130只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，即正常组，甲强龙(12mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射小剂量(2mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，迷迭香酸静脉
***
6
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注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，迷迭香酸灌胃剂
量(10mg/kg)组1，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组
3，迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4，除正常组外，每只大鼠ip腺嘌呤150mg/kg，连续
给予腺嘌呤5天，2天后，大鼠眼框取血，测定血清肌酐和尿素氮，观察造模情况，从第8
天开始给药，连续给药14天，从眼眶取血，测定血清肌酐和尿素氮(肌酐和尿素氮试剂盒测
定肌酐和尿素氮)，处死作病理切片，观察肾功能的病理改变。
从表2结果可以看出，迷迭香酸静脉注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸灌胃剂量
(10mg/kg)组1降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.05)；甲强龙
(12mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸静脉注射大剂量(25mg/kg)
组2，迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组
4，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3，迷迭香酸灌胃
剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.01)；
迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸
静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组
3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著
性差异。
病理检查：正常对照组肾组织结构正常，模型组有明显肾组织结晶沉淀物，肾小管破坏，
萎缩，管腔变小，其中可见淋巴细胞浸润及局部纤维组织增生，肾小球肿大，肾小球上皮细
胞出现空泡变性，内皮细胞下出现大量疏松物质，基底膜增厚，定量分析肾小管面积与肾小
球体积，模型组与正常对照组比较有显著性差异。迷迭香酸各组各剂量组随剂量增加损伤程
度明显减轻，但仍未恢复至正常水平。
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表2迷迭香酸对大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮的影响
组别正常组模型组甲强龙组
剂量(mg/kg)-----12251025501001050100200
血清肌酐(mg/dL)0.48±0.052.03±0.23
**
1.15±0.131.90±0.221.80±0.18
**
1.52±0.371.32±0.28
**
1.20±0.22
**
1.19±0.39
*
1.82±0.19
**
1.67±0.281.53±0.281.50±0.26
*****
说 明 书 第6/9页
血清尿素氮(mg/dL)10.05±2.5240.57±4.55
**
18.21±3.2538.01±3.2435.91±3.60
**
30.42±7.3626.76±4.19
**
22.07±3.45
**
21.85±5.88
**
36.37±3.85
**
31.47±5.6028.96±3.9527.76±5.30
*****
迷迭香酸静脉注射组
****
迷迭香酸灌胃组
，p＜0.05，，p＜0.01，与模型组比较 试验3迷迭香酸对肾切除导致大鼠慢性肾衰的影响 3.1药品与试剂
迷迭香酸：按制备例1制备；
甲强龙：比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706； 肌酐和尿素氮试剂盒：北京中生科技公司，批号：050606；
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。 3.2试验方法与结果
大鼠195只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，每组15只，即正常组，甲强龙(12mg/kg)组，迷迭香酸注射小剂量(2mg/kg)组，迷迭香酸注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸注射大剂量(25mg/kg)组2，迷迭香酸注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸注射大剂量(100mg/kg)组4，迷迭香酸灌胃剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3，迷迭香酸
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灌胃剂量(200mg/kg)组4，除正常组外，大鼠用5/6肾切除方法制成慢性肾衰模型，第一次手术切除左肾2/3，一周后行第二次手术切除右肾，第二次手术后一周开始给药，给药方式为灌胃给药或腹腔注射给药，给药后4周、8周分别大鼠眼框取血，测定血清肌酐和尿素氮，给药后4周处死5只，试验结束处死10只，作病理切片，观察肾功能的病理改变。 从表3、表4结果可以看出，迷迭香酸静脉注射中剂量(5mg/kg)组，迷迭香酸灌胃剂量(10mg/kg)组1降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.05)；甲强龙(12mg/kg)组，迷迭香酸静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，迷迭香酸静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，迷迭香酸灌胃剂量(50mg/kg)组2，迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3，迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p＜0.01)；迷迭香酸静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；迷迭香酸灌胃剂量(100mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与迷迭香酸灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著性差异。
病理改变：给药第4周模型组光镜下见肾小球有不同程度代偿性肥大，系膜细胞增生，系膜基质增多，肾小球毛细血管襻呈分叶状，部分肾小球囊腔消失，毛细血管管壁增厚，肾小管肿胀、扩张，管腔内有蛋白沉积，部分小管萎缩，间质有炎性细胞浸润，各给药组亦见上述改变，但病变程度较轻，随剂量增大，病变程度减轻；给药第8周模型组光镜下见系膜细胞增生，基质明显增多，毛细血管管壁塌陷，毛细血管节段性硬化，硬化区多在血管壁附近硬化的肾小球内可见均质圆形PAS染色深红色的沉积物，个别肾小球有局灶球囊粘连，局灶新月体形成，间质可见炎细胞浸润，纤维组织增生，各组肾小球硬化程度不等，随剂量增大，病变程度减轻。
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表3迷迭香酸对大鼠肾切除慢性肾衰给药4周血清肌酐和尿素氮的影响
组别正常组模型组甲强龙组
剂量(mg/kg)-----12251025501001050100200
血清肌酐(mg/dL)0.50±0.051.72±0.19
**
0.83±0.131.62±0.181.53±0.15
**
1.29±0.311.12±0.24
**
1.02±0.19
**
1.01±0.33
*
1.55±0.16
**
1.42±0.241.30±0.221.29±0.28
*****
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血清尿素氮(mg/dL)9.05±2.5222.54±2.53
**
15.21±3.2521.12±2.4019.95±2.20
**
16.90±4.0914.63±3.25
**
13.39±2.45
**
12.85±3.88
**
20.21±2.22
**
18.60±3.1117.01±3.9516.76±4.30
*****
迷迭香酸静脉注射组
****
迷迭香酸灌胃组
，p＜0.05，，p＜0.01，与模型组比较
***
10
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表4迷迭香酸对大鼠肾切除慢性肾衰给药8周血清肌酐和尿素氮的影响
组别正常组模型组甲强龙组
剂量(mg/kg)-----12251025501001050100200
血清肌酐(mg/dL)0.7±0.082.33±0.26
**
1.25±0.172.19±0.222.06±0.21
**
1.75±0.371.51±0.32
**
1.39±0.26
**
1.37±0.44
*
2.09±0.22
**
1.92±0.321.76±0.301.74±0.36
*****
说 明 书 第9/9页
血清尿素氮(mg/dL)9.05±2.3228.98±3.25
**
18.21±4.2527.15±3.0925.65±2.57
**
21.73±5.2619.25±3.19
**
15.07±3.45
**
14.85±3.88
**
25.98±2.72
**
23.91±4.0021.96±3.9520.76±5.50
*****
迷迭香酸静脉注射组
****
迷迭香酸灌胃组
，p＜0.05，，p＜0.01，与模型组比较
***
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