饲料营养成分分析
卢建雄 申晓蓉 编
西北民族大学 生命科学与工程学院
目 录
实验一 饲料样品的采集与制备方法 .............................................. 2 实验二 饲料水分的测定 .................................................................. 7 实验三 饲料粗灰分的测定 .............................................................. 9 实验四 饲料粗蛋白质的测定 ........................................................ 11
附：2300自动定氮仪(Kjeltec 2300 Analyzer) ........................ 14 实验五 饲料脂类测定 .................................................................... 16 实验六 饲料粗纤维测定 ................................................................ 19
附：粗纤维测定仪（Fibertec 2010） ...................................... 21 实验七 饲料中无氮浸出物（NFE）计算—差值计算 ................. 25 实验八 饲料及产品的热值测定 .................................................... 27 实验九 饲料中钙的测定（高锰酸钾法） .................................... 32
附：乙二胺四乙酸二钠（EDTA）络合滴定快速测钙法 ...... 35 实验十 饲料中总磷量的测定 .......................................................... 37
附：饲料中植酸磷的测定（TCA法） ................................... 39
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实验一 饲料样品的采集与制备方法
饲料分析结果的准确性取决于样品的代表性，因此饲料样品的采集与制备方法是饲料分析
和检测的重要环节。
一 样品采集的目的与要求
由一种物品中采集供分析用的样品称为采样或取样。采样是饲料分析的第一步。采样的根本目的是通过对样品理化指标的分析，客观地反映受检饲料原料或产品的品质。因此，所采取的样品必须具有代表性，即能够代表全部被分析的原料物品。否则，即使以后的分析方法和处理无论多么严谨﹑精确，所得出的分析结果都毫无科学性﹑公证性和实用价值。对饲料加工业而言，采样正确与否将影响其多方面的决策，例如，饲料配方设计时对原料的选择，对一批原料的取舍与对加工程度的确定，饲料产品是否符合其规格要求与保证值，对全部的保证项目在规定的期限内是否稳定以及加工条件控制是否适当及官方检验的必要性等。显然，饲料生产和质量控制人员的许多决策问题需要以样品的指标为依据。因此，正确的采样应该是从有不同代表性的区域取几个样点，然后把这些样品充分混合，使之成为整个饲料的代表样品，然后再从中分出一小部分作为分析样品之用，其最后的分析结果就作为整个被采取样品饲料的平均值。
要使采样合乎规范化，则必需加强管理。管理人员还须指导采样人员掌握正确的采样方法及了解采样原料的基本特点。采样人员必须熟悉各种原料、加工工艺、产品，必须严格按规定的各种采样方法采样以及采用特定的仪器设备。采样人员应通过专门培训，且具有高度责任心和熟练的采样技能方能上岗。在采样过程中，要认真按操作规程进行，并做到随机，客观，避免人为和主观因素的影响，及时发现和报告一切异常的情况。
采样工具的制造原料要求耐磨损而且是不易损坏的材料(如不锈钢)。 二、样品采集的方法与原则 （一） 常用样品类别与定义 1.术语与定义
（1）交付物：一次给予、发送或收到的某个特定量的饲料的总称。 注:它可能由一批或多批饲料组成。
（2）批(批次)：假定特性一致的某个确定量的交付物的总称。 （3）份样：一次从一批产品的一个点所取的样品。
（4）总份样：通过合并和混合来自同一批次产品的所有份样得到的样品。 注:打算分别调查的、明显和可辨认的份样集合可表示为“总样品”。
（5）缩分样：总份样通过连续分样和缩减过程得到的数量或体积近似于试样的样品，具有代表总份样的特征。
（6）实验室样品：由缩分样分取的部分样品，用于分析和其他检测用，并且能够代表该批产品的质量和状况。
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注:所取每种样品，一般分3份或4份实验室样品，一份提交检验，至少一份保存用于复核，如果要求超
过4份实验室样品，需要增加缩分样，以满足最小实验室样品量的要求。
2.样品类别
（1）标准样品：是指由权威实验室仔细分析化验后的样品。如再由其它实验室进行分析化验，可用标准样品来校正或确定某一测定方法或某种仪器的准确性。
（2）商业样品：是指由卖方发货时，一同送往买方的样品。
（3）参考样品：指具有特定性质的样品，在购买原料时可作为参考比较，或用于鉴定成品与之有无颜色﹑结构及其它表现特征上的区别。
（4）备用样品：指在发货后留下的样品，供急需时备用。
（5）仲裁样品：指由公正的采样员所采取的样品。然后送仲裁实验室分析化验，以有助于买卖双方在商业贸易工作中达成协议。
（6）化验样品：实验室样品，指送往实验室或检验站分析的样品。 （二） 样品采集的方法和原则
代表性采样：代表性采样的目的是从一批产品中获得小部分样品，而测定这小部分样品的任何特性均可代表该批产品的平均值。
选择性采样：如果被采样的一批(批次)样品的某部分在质量上明显不同于其他部分，则这部分产品应区别对待，单独作为一批产品进行采样，并在采样报告中加以说明。
采样的一般方法，可先采取原始样品，再从原始样品中采取分析样品。由生产现场如田间、牧地、仓库、青贮窖和试验场等大量分析对象中采集的样品叫原始样品。原始样品应尽量从大批量饲料或大面积牧地上，按照不同的部位和不同深度和广度来采取，以保证每一小部分与其全部的成分完全相同，使其具有代表性。然后，再从原始样品中采取分析样品。为了使样品的取舍均匀一致，对于均匀性的物品，即单相的液体或是搅拌均匀的籽实﹑磨成粉末的各种糠麸等饲料以及研碎的物品，可用“四分法”来缩减原始样品。方法是：将籽实﹑粉末及可研碎的物品置于一张方形纸或塑料布上（大小视样品的多少而定），提起纸的一角，使籽实或粉末等流向对角，随即提起对角使籽实或粉末等流回，如此将四角轮流反复提起，使粉末反复移动混合均匀，然后将籽实﹑粉末等铺平成方形，用药铲﹑刀子或其它适当器具，从中划一 “十”字或以对角线相连接，将样品分成4等份，除去对角的两份，将剩余的两份，如前述混合均匀后中，再分成4个等份，重复上述过程，直至剩余样品与分析样品所需用量相接近时为止。
对于大量的籽实﹑粉末和等均匀性饲料的分析样品采样，也可在洁净的地板上堆成锥形，然后将堆移至另一处，移动时将每一铲饲料倒于前一铲饲料之上，这样使籽实﹑粉末由锥顶向下流动到周围，如此反复移动三次以上，即可混合均匀。最后，将饲料堆成圆锥形，将顶部略压平成圆台状，再从上部中间分割为十字形4等份，弃去对角线的两等份，缩减二分之一，然后，如上法缩减至适当数量为止。一般饲料样品缩减取样至500g左右作为分析用样品，送实验室供化学分析之用。
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对于不均匀的物料如各种粗饲料﹑块根﹑块茎饲料﹑家畜屠体等，则需要较复杂的采样技术。其复杂程度随物料体积的大小和不均匀程度而定，一般可采用“几何法”取样，具体方法如下：把整个一堆物料看成一种规则的几何体，如立方体﹑圆锥体﹑圆柱体等，取样时先将该立体分成若干体积相等的部分（或在想象中将其分开），这些部分必须是在原样中均匀分布的，而不只是在表面或只是在一面。从这些部分取出体积相等的样品，称之为支样，将这些支样混合后即为“初级样品”。如此，重复取样多次，得到一系统逐渐减少的样品叫“初级”﹑“次级”﹑“三级”……等样品，然后由最后一级样品中制备分析用样品。
对配合饲料或混合饲料的取样，其采样方法相对而言比较容易。如在水平卧式或垂直式混合机（搅拌机）里的饲料采样，只要确定饲料已充分混合均匀了，就可以直接从混合机的出口处定期（或定时）地取样，而取样的间隔应该是随机的。
混合饲料中不同的成分的颗粒大小及吸湿性可能不一样，这将给混合饲料准确采样带来麻烦。因此，在某些情况下，可将混合饲料含有的成分单独进行分析。但必须注意在称重上要准确无误并且是混合均匀的饲料。
采样的原则是所采集的样品必须具有代表性。为此，应遵循正确的采样方法，尽可能地采取被检测饲料的各个不同部分，并把它们磨碎至相当程度（粉碎粒度要求40~60目），以有利于增加其均匀性和便于溶样。
三、采样与制备方法
（一） 粉料与颗粒料
对于磨成粉未的各种谷物和糠麸以及配合饲料或混合饲料，预混料等饲料的采样，由于贮存的方式不同，又分为散装﹑袋装﹑仓装三种。所选用的取样器探棒，又称探管或探枪，可以是有槽的单管或双管，具有锐利的尖端。
1.散装 散装的原料应在机械运输过程的不同场所（如滑运道﹑供送带等处）取样。 如果在机械运输过程中未能取样，可用探棒取样，但应该避免因饲料原料不匀而造成的错误取样。
（1）散装车箱原料及产品：使用抽样锥自每车至少10不同角落处采样。方法是使用短柄大锥的探棒，从距离边缘0.5m和中间五个不同的地方，不同的深度选取。将从汽车运输散状和颗粒产品中采取的原始样品置于样品容器容器后，并以“四分法”缩样。
（2）散装货柜车原料及产品：从专用汽车和火车车厢里采取散装和颗粒状产品的原始样品可使用抽样锥，自货柜车5～8个不同角落处抽取样品，也可以卸车时用长柄勺，自动选样器或机械选样器等，间隔相同时间，截断落下的料流采取，置于样品容器中混合后，再按“四分法”缩样至适量。
2．袋装（包装） 关于袋装原料的取样，可以在袋装货运时应用探棒从几个袋中取样，以获得混合的样品。一般可按原料总袋数的10% 采取原始样品。
（1）袋装车厢原料及产品：用抽样锥随意的自至少10% 袋数的饲料中取样。方法是对编织袋包装的散状或颗粒状饲料的原始样品，用取样器从料袋的上下两个部位取样，或将料袋放平，
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从料袋的头到底斜对角插入取样器，插取样器前用软刷刷净选定的位置，插入时应使槽口向下，然后转180º，再取出。取完样品后将袋口封好;而用聚乙烯衬的纸袋或编织袋包装的散装成品的原始样品，则用短柄锥形袋式，大号取样器从拆了线的料袋内上﹑中﹑下三个部位采样。对颗粒状产品的原始样品，是用勺子在拆了线的口袋取样。将采取的原始样品置于样品容器中混合后，按“四分法”缩样至适量。袋装饲料采样方案见表2-1。
表1-1 袋装饲料采样方案
饲料包装单位（袋） 10以下 10~100 100以上
取样包装单位（袋） 每袋取样
随机化选取10袋
从10个包装单位取样，每增加100个包装单位需补采3个单位
（2）袋装货柜车原料及产品：使用抽样锥随意的自至少10% 袋数的饲料中取样，置于样品容器中混合后再缩样至适量。
3．仓装 一种方法是在饲料进入包装车间或成品库的流水线或传送带上，贮塔下﹑料斗下﹑秤上或工艺设备上采取原始样品。其方法是用长柄勺，自动或机械式采样器，间隔时间相同，截断落下的饲料流。选择的时间应根据产品移动的速度来确定，同时要考虑到每批采取的原始样品的总重量。对于饲料磷酸盐、动物饲料粉和鱼粉应不少于2kg，而其它饲料产品则不低于4kg。
另一种是贮藏在饲料库中的散装产品的原始样品的采取，料层在1.5m以下时用车厢和探棒取样，料层在1.5m以上时，使用有旋杆的探管取样。采样前先将表面划分成六个等分，在每一部分的四方形对角线的四角和交叉点五个不同地方采样。料层厚度在0.75m以下时，从两层中采取,即从距料层表面10~15cm深处的上层和靠近地面上的下层采取。当料层厚度在0.75cm时，应从三层中采取，即从距料层表面10~15cm深处的上层、中层和靠近地面的下层采取。在任何情况下，原是样品都是先从上层，然后是中层，下层依次采取的。颗粒状产品的原始样品使用长柄勺或短柄大号锥形探管，在不少于30cm深处采取的。
贮藏在贮塔中的散状或颗粒状产品的原始样品的取样，是在其移入另一贮塔或仓库时采集的。
将所采取的原始样品（包括散装、袋装和仓装）混合搅拌均匀，用四分法采取500g样品，用粉碎机粉碎过1mm筛网，混合均匀后盛于两个样品瓶中，一份供鉴定或分析化验用，另一份供检查用（注意封闭，放置干燥洁净处保存一个月）。如为不易粉碎的样品，则应尽量磨碎。尤其要注意的是，如果所采取的样品为添加剂预混料，由于其粒度较小，故制备时应避免样品中小颗粒的丢失。
（二）液体原料
1．动物性油脂 在一批饲料中由10%的包装单位中采集平均样品，最少不低于三个包装单位。在每一包装单位（如桶）中的上、中、下三层分别取样，由一批饲料中采取的平均样品为
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600g左右。所使用的取样工具是空心探针（这种取样器是一个镀镍或不锈钢的金属管子），直径为25mm，长度为750mm，管壁具有长度为715mm，宽度为18mm的空，孔的边缘应为圆滑的，管的下端应为圆锥形的，与内壁成15°角，管上端装有把柄。采样时先打开装有饲料油脂的容器，然后在距油脂层表面深约50cm处取样。油脂样品应放在清洁干燥的罐中，通过热水浴加热至油膏状充分搅拌均匀。
2．糖蜜 糖蜜等浓稠饲料由于富有粘性或含有固形物，故其取样方法特殊。一般可在其卸料过程中采用抓取法采样，可定时用勺等器皿随机取样（约500g）即可。例如，分析用糖蜜平均样品可直接由工厂的铁路槽车或仓库采集。用特制的采样器通过槽车和仓库上面的舱口在上、中、下三层采集。所采集的样品体积为每吨糖蜜至少1L。原始样品用木铲充分搅拌后即可作为平均样品。
（二） 副食及酿造加工副产品
这类饲料包括酒糟、粉渣、豆渣等。其采样方法是：在木桶、贮藏池或贮藏堆中分上、中、下三层取样，按桶、池或堆的大小每层取5~10个点，每个采样点取100g放入瓷桶内充分混合随机取分析样品约500g，用其中200g测定初水分，其余放入大瓷盘中，在60~65℃恒温干燥箱中干燥。豆渣和粉渣等含水较多的样品，在采样过程中应注意勿使汁液损失及时测定干物质百分含量。为避免腐败变质，可滴加少量氯仿或甲苯等防腐剂。
（三） 油饼类
大块的油饼类采样，一般可以从堆积油饼的不同部位选取不少于五大块，然后从每块中切取对角的小三角形，将全部小三角形块锤碎混合后，再用“四分法”取分析样品约200g左右，经粉碎机粉碎后装入样品瓶中。小块的油饼，要选取具有代表性者数10片，粉碎后充分混合，用“四分法”取供分析的样品约200g。
（四） 块根、块茎和瓜类
此类饲料因其含水分多和不均匀性，采样时应由多个单独样品以消除每个样品间的差异。样品个数的多少，根据成熟均匀与否，以及所测定的营养成分而定，详见表1-2。
表1-2块根、块茎和瓜类取样数量
种类 个数（个） 一般的块根﹑块茎饲料 10~20 马铃薯 50 胡萝卜 20
南瓜 10
采样方法：从田间或贮藏窖内随机分点采取原始的15kg，按大、中、小分堆称重求出比例，按比例取5kg，先用水洗干净，洗涤时注意勿损伤样品的外皮，洗涤后用布拭去表面的水分。然后，从各个块根的顶端至根部纵切具有代表性的对角1/4，1/8或1/16直至适量
的分析样品，迅速切碎后混合均匀取300g左右测定初水分，其余样品平铺于洁净的瓷盘内
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或用线串连置于阴凉通风处风干2~3天，然后在60~65度的恒温干燥箱中烘干。
（六）新鲜青绿饲料及水生饲料
牧地青饲料可按牧地类型划分地区分点采样，每区选5个以上的采样点，每个采样点一平方的范围，在此范围内离地面3~4cm处割取牧草，除去不可食草，将各点原始样品剪碎，混合均匀后取分析样品500~1000g。栽培的青绿饲料应视田地面积的大小按上述方法等距离分点，每点采1至数株，切碎混合后取分析样品（见图2-4）。此法也适用于水生饲料，但应注意采样后要晾干样品外表游离水分，然后切碎取分析样品。
（七）青贮饲料
青贮饲料饲料的样品一般在圆形窖﹑青贮塔或长方形青贮壕内采取。取样前应除去覆盖的泥土，秸杆以及发霉变质的青贮料。然后按图2-5和2-6中所示的采样点分层取样，原始样品重500~1000g。长方形青贮壕的采样点视青贮壕长度大小可分为若干段，每段设采样点分层取样。 （八）粗饲料 应用“几何法”在秸杆或干草的堆垛中选取五个以上不同部位的点采样，每个点采样约200g左右，作为原始样品。然后将采取的原始样品放在纸或塑料布上，剪成1~2cm长度，充分混合后取分析样品约300g，粉碎过筛装瓶。应当注意的是，在采取原始样品和分析样品过程中，应尽量避免叶片的脱落损失，影响其营养成分的含量，制备样品时少量难以粉碎的秸杆渣屑应当捶碎弄细均匀混入全部分析样品中，决不能丢弃，保持样品的完整性或具有代表性。
实验二 饲料水分的测定
按照概略养分分析，饲料中的营养物质可以分成水分和干物质。测定饲料的水分含量，就可以计算出干物质量。饲料中的水分包括游离水和结合水，因此测定也可以分两步进行，先测定初水分（游离水），再测定吸附水（结合水），然后计算出饲料的总水分。饲料水分的测定方法可分为直接法和间接法两大类。直接法是利用饲料水分自身的理化性质来测定的，常用的有重量法（常压干燥法、减压干燥法、蒸馏法等）和化学法（如卡尔.费希尔法）。间接法是利用水分含量与其物理化学性质的相关性为基础的方法。此外，近红外吸收光谱法、中子活化法、气相色谱法以及核磁共振谱等近代仪器分析方法已引入饲料水分测定中，但这些方法需要价格昂贵的仪器，不易普及。在具体分析工作中，还应考虑饲料中是否有其它挥发性物质存在、是否需低温真空、某些化合物是否可起化学变化等, 具体情形不同，采用的分析方法也不同，现行饲料水分测定仍以干燥法为标准分析方法。
测定饲料中水分，不仅间接获得了干物质含量，同时也为其它营养成分的分析制备分析的样品，使不同饲料中各种营养成分的相互比较有一致的基础；对饲料在贮存、加工、运输过程中防止某些营养成分的转化、变性、霉烂等，都有指导意义。
烘箱干燥法
烘箱干燥法是AOAC规定的方法，将样品放在105土2℃烘箱中烘至恒重，所失重量即代表
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水分含量。这种方法有一定误差，因为在水分蒸发的同时，一些短链脂肪酸和有机酸等易挥发性物质有挥发损失。 （一） 原理
将风干(或半干)试样置于105±2℃烘箱中，在一个大气压下烘干，直至恒重，烘后所失去的重量即为吸附水。实际上在此温度下烘干所失去的不仅是吸附水，还含有一部分胶体水分，此外，也有少量挥发油挥发及少量碳水化合物分解。与此同时，试样中的脂肪也可能氧化而使重量增加。
本法适用于测定配合饲料及单一饲料中的吸附水含量，不适合于用作饲料的奶制品、植物及动物油脂等样品的测定。 （二）仪器设备
1．分析天平：感量0.0001g； 2．实验室用样品粉碎机或研钵； 3．分样筛：40目、60目；
4．电热式恒温干燥箱（烘箱）：可控温度为105土2℃； 5．干燥器：用氯化钙或变色硅胶作干燥剂；
6．称样皿：玻璃或铝质，直径为40mm以上，高25mm以下； 7．坩埚钳和药匙。 （三 ） 试样的选取与制备
1．选取1000g以上具有代表性的原始样品；
2．用四分法将原始样品缩至500g，风干后粉碎过40目筛，再用四分法缩至200g，装入密封容器，放阴凉干燥处保存；
3．如试样是多汁的鲜样，或无法粉碎时，应预先干燥处理。方法是：在已知重量的瓷盘中称取200～300g的鲜样（W1），在105±2℃烘箱中烘15min，立即降至65℃，烘干5～6h。取出后，在室内空气中冷却4h，称重，即得半干样品（与风干试样同样）（W2），同时计算初水分含量。
初水分（％）＝（四）测定步骤
1．取洁净称样皿置于105土2℃烘箱中烘1h取出，在干燥器中冷却30min(冷却至室温)，称重(准确称至0.0002g)。
2．将称样皿再烘30min，同样冷却，称重，至两次重量之差小于0.0005g为恒重． 3．用已恒重的称样皿称取2份平行试样，每份2～5g(含水量0.1g以上，试样厚度为4mm以下)，准确称至0.0002g。
4．将称样皿半开盖，在105土2℃烘箱中烘3h(以温度至105℃开始计时)后取出，盖好称样
W1-W2×100 W1 8
皿盖，在干燥器中冷却30min，称重。
5．再同样烘干1h，冷却，称重，至两次重量之差小于0.002g为止，以其中较小的值进行计算。
测定吸附水后的试样，可保留以用作粗脂肪和粗纤维测定。 (五) 测定结果计算 1． 计算公式： 水分（％）=
W1W2×100
W1W0式中：W1——105±2℃烘干前试样及称样皿重量（g）；
W2——105±2℃烘干后试样及称样皿重量（g）； W0——已恒重的称样皿重量（g）。
2．重复性 每个试样，应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值相差不得超过0.2%，否则应重做。
3．如果按上述(三) 3步骤进行过预先干燥处理（指多汁的鲜样），则应按下式计算原来试样中所含水分总量：
原样总水分（%）=初水分（%）+[100%－初水分（%）]×风干试样水分（%） 说明：
① 某些脂肪含量高的样品，烘干时间长反而增重，乃脂肪氧化所致，应以增重前次称量为准。 ② 含糖分高的易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法测定水分。
实验三 饲料粗灰分的测定
粗灰分是饲料样品在高温炉中将所有有机物质全部氧化后剩余的残渣。主要为矿物质氧化物或盐类等无机物质，有时还含有少量泥沙。灰分分水溶性与水不溶性、酸溶性与酸不溶性灰分。水溶性灰分大部分是钾、钠、钙、镁等氧化物和可溶性盐，水不溶性灰分除泥沙外，还有铁、铝等的氧化物和碱土金属的碱式磷酸盐。酸不溶性灰分大部分为污染掺入泥沙和原来存在于动植物组织中经灼烧成的二氧化硅。测定粗灰分，可掌握饲料中的灰分总量，了解不同生长期、不同器官中灰分的变动情况；也可在此基础上测定灰分中组成元素的含量。此外，测定粗灰分对饲料品质鉴定也有参考意义，若含量过高，饲料中可能混入砂石、土等。
一、测定原理
试样在550℃灼烧后，所得残渣，用质量百分数表示。残渣中主要是氧化物，盐类等矿物质，也包括混入饲料中的砂石、土等，故称粗灰分。
二、仪器和设备
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1．实验室用样品粉碎机或研钵。 2．分析筛：40目。
3．分析天平：感量0.0001ｇ。
4．高温电炉：电加热，有温度计且可控制炉温在550±20℃。 5．坩埚：50ml，瓷质。 6．坩埚钳
7．干燥器：用氯化钙（干燥试剂）或变色硅胶为干燥剂。
三、测定步骤
1． 坩埚恒重：将干净坩埚放入高温炉中，在550±20℃下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却30min，称重。再重复灼烧，冷却、称重，直至两次质量之差小于0.0005ｇ为恒重。
2．称样品：在已知质量的坩埚中称取2～5ｇ试样（勿使样品高于坩埚深度的1/2，灰分质量应在0.05ｇ以上）。
3．炭化：将盛有样品坩埚放在电炉上，坩埚盖须留一小缝隙，小心炭化，在炭化过程中，应在低温状态加热灼烧直至无烟，然后升温灼烧至样品无炭粒（勿着明火）。
4．灰化及称恒重：将炭化至无烟坩埚用坩埚钳移入高温炉内，坩埚盖须留一小缝隙，在550±20℃下灼烧3ｈ，待炉温降至200℃以下，取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却30min，称重。再同样灼烧1ｈ，冷却、称重，直至两次质量之差小于0.001ｇ为恒重。
四、测定结果的计算
1. 计算公式 试样中粗灰分含量（%）按下式计算： 粗灰分（%）＝
m2m0×100
m1m0式中： m0——已恒重空坩埚的质量，ｇ；
m1——坩埚加试样的质量，ｇ； m2——灰化后坩埚加灰分的质量，ｇ。
2.允许差 每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗灰分含量在5％以上时，允许相对偏差为1％；粗灰分含量在5％以下时，允许相对偏差为５％。
五、注意事项
1．坩埚的准备：新坩埚编号，将带盖的坩埚洗净烘干后，用钢笔蘸5ｇ/L氯化铁墨水溶液（称0.5ｇFeCl3·6Ｈ2Ｏ溶于100ｍl水中）编号，然后于高温炉中550℃灼烧30min即可。
2．试样开始炭化时，坩埚盖须留一小缝隙，便于气流流通；温度应逐渐上升，防止火力过
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大而使部分样品颗粒被逸出的气体带走。
3．为了避免试样氧化不足，不应把试样压得过紧，应松松放在坩埚内。 4．灼烧温度不宜超过600℃，否则会引起磷、硫等盐的挥发。
5．灰化后样品应呈白灰色，但其颜色与试样中各元素含量有关，含铁高时为红棕色，含锰高为淡蓝色。如有明显黑色炭粒时，为炭化不完全，可在冷却后加几滴硝酸或过氧化氢，在电炉上烧干后再放入高温炉灼烧直至呈白灰色。
实验四 饲料粗蛋白质的测定
蛋白质是由氨基酸以肽键构成的多肽高分子化合物，它存在于一切动植物体中，是一切细胞和组织的基本组成成分，承担着体内各种复杂的生理、生化功能，它是体现生命现象的物质基础。动物从饲料中摄取蛋白质及其分解产物，以组成自身的蛋白质。因此，蛋白质含量是评价饲料营养价值的主要指标。
各种蛋白质中都含有一定比例的氮。长期以来，人们通过测定饲料总氮量来估计蛋白质含量。然而，各种饲料中除蛋白质含有氮素外，还有一些化合物，如核酸，生物碱，含氮碳水化合物，含氮类脂、卟啉、酰胺，色素以及硝态氮等，也含有氮素。因此，用测定总氮量计算出的“蛋白质”，实际上包括真蛋白和非蛋白氮物质，总称为粗蛋白质。
由总氮量换算蛋白质含量时，通常采用系数6.25。这是按蛋白质中平均含氮量为16% 推算出来的。其实，不同饲料中蛋白质含氮比例是有差别的。因此，应当提倡不同饲料采用 不同的比例系数。例如，荞麦、玉米，碗豆为6.25，稻米为5.95，全小麦，大麦、谷子为5.8，大豆为5.71，小麦麸为6.31，牛奶为6.38。只有对含氮比尚不清楚的饲料采用平均比例系数为6.25。
蛋白质的测定方法分为直接法和间接法两类。直接法是利用蛋白质物理性质或化学性质，直接测定蛋白质含量的方法。常用的有紫外吸收光度法、折光法、双缩脲法、酚试剂法、染料结合法等，但其中有些方法不适合于混合饲料分析。间接法则是通过测定样品中的总氮量，进而推算出蛋白质含量的方法，即粗蛋白的测定方法。常用的有凯氏法，杜马斯法，奈氏比色法和次氯酸比色法等。
长期以来，人们不断致力于凯氏法的改进，在缩短消化时间和提高氮的回收率等方面作了大量深入的研究，目前已提出数十种催化剂。为提高凯氏法的仪器自动化水平，近年来已研制出几种自动或半自动的蛋白质分析仪。随着科学技术的发展，近代仪器分析方法如中子活化、分光光度法、X射线分光光度法、紫外分光光度法和红外分光光度法等，也用于蛋白质的测定中。
凯式定氮法测定饲料粗蛋白质含量
凯式定氮法是1833年由凯达尔（Kjedehl）首创，后经多人改进，迄今仍广泛应用于土壤、肥料、饲料和食品的分析中。此法具有较高的准确度和精确度，美国分析化学家协会（AOAC）、
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国际谷物化学协会（ICC）等组织都将其确定为法定分析方法。
（一）原理
饲料中的有机物在浓硫酸作用下被消化，其中真蛋白质和氨化物中N转化为(NH4)2SO4中N，其它非氮物质则以CO2、H2O和SO2逸出：
催化剂 2CH3CHNH2COOH＋13H2SO4 (NH4)2SO4＋6CO2↑＋12SO2↑＋16H2O
加热消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，放出的NH3用硼酸吸收：
(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO4
4H3BO3+NH3→NH4HB4O7+5H2O 然后以甲基红－溴甲酚绿作指示剂，用标准酸溶液滴定： NH4HB4O7+HCI+5H2O → NH4CI+4H3BO3
根据酸标准溶液的浓度和消耗的体积，即可计算出氮的含量，乘以相应的蛋白质换算系数(一般用6.25)，即为粗蛋白质含量。
(二) 仪器设备
（1）实验室用样品粉碎机或研钵； （2）分样筛：40目； （3）分析天平：感量0.000lg； （4）消煮炉或电炉；
（5）滴定管：酸式，25ml、10ml； （6）凯氏烧瓶：250或500ml；
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式、微量蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式； （8）锥形瓶：150或250m1； （9）容量瓶：100ml； （10）通风橱。 (三) 试剂
（1）硫酸：化学纯； （2）硫酸铜：化学纯； （3）硫酸钾或硫酸钠：化学纯；
（4）氢氧化钠：分析纯，40g溶于100ml水配成40%水溶液(W／V)； （5）硼酸：分析纯，2g溶于100ml水配成2%溶液(W／V)；
（6）混合指示剂：甲基红0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存（三个月以内可用）；
（7）0.05mol/L盐酸标准溶液：4.2ml盐酸（分析纯）,用蒸馏水稀释到1000ml，用邻苯二甲酸氢钾法标定。
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（8）硫酸氨：分析纯。
(四) 试样的选取与制备 取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。液体或软膏状粘液试样应注意取样的代表性，用干净的可放入凯式烧瓶的小玻璃容器称样。
（五）测定步骤
1．试样的消煮 称取0.5～1g试样(含氮量5～80mg，准确至0.0002g)，于光洁纸上，卷成圆筒水平插入烧瓶中，无损地倒入凯氏烧瓶底部，加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钾(或硫酸钠)15g，与试样混合均匀，再加浓硫酸25mI和2粒玻璃珠，在消煮炉上小火加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力(360~410℃)直至溶液澄清透明呈纯蓝色，再继续加热至少30min。
2．氮的蒸馏
（1）常量直接蒸馏法（主要用于含氮量低的样品）：蒸馏装置见图4-1。
将试样消煮液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。沿瓶壁小心加入40%氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连。蒸馏装置冷凝管口浸入50ml 2％硼酸溶液内，加混合指示剂2滴．轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏，直到馏出液体积约为150m1。移动三角瓶，使冷凝管口离开液面，再蒸馏1min.。用少许蒸馏水冲管口，移开三角瓶，即可滴定。
（2）半微量蒸馏法：蒸馏装置见图4-2。
将试样的消煮液冷却，加蒸馏水20ml，转入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。取10ml 2％硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量蒸 馏装置的冷凝管
图4-1 常量蒸馏装置末端浸入此溶液．蒸馏装置的蒸气发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色．否则补加硫酸。准确移取试样分解液10～20ml注入蒸馏装置的反应室中。用少量蒸馏水冲洗进样入口。塞好入口玻璃塞，再加10ml 40%氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好。且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min.，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液，准备滴定。
3．滴定 吸收氨后的吸收液立即用0.05mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。
4．试剂空白测定 按上述步骤进行
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图4-2 半微量凯氏定氮蒸馏装置
空白测定，消耗0.05mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.3ml。
(六) 测定结果的计算 1．计算公式： 粗蛋白质(%)=
(V1V2)c0.0140V4××F×100
mV3式中：V2——试样消耗盐酸标准溶液的体积（ml）；
VI——试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积（ml）； c ——盐酸标准溶液摩尔浓度（mol/L）； m——试样质量（g）；
V3——试样分解液蒸馏用体积（ml）； V4——试样分解液总体积（ml）； 0.0140——氮的毫摩尔质量；
F ——氮换算成蛋白质的系数（平均值为6.25）。
2．重复性 每个试样取两平行样进行测定．以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％，当粗蛋白质含量在10～25％时，允许相对偏差为2％，当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。
(七) 测定步骤的检验
精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按(五)的各步骤操作，按(六)的公式计算(但不乘系数6.25)测得硫酸铵含氮量为21.19土0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
附：2300自动定氮仪(Kjeltec 2300 Analyzer)
一．试剂
1． 硫酸（浓）：95-98%H2SO4试剂纯
2． 铜催化剂：含铜凯氏催化片（每片含3.5g K2SO4和 0.4g CuSO4） 3． 氢氧化钠：40% w/w 无氮NaOH
4． 甲基红指示剂溶液：溶解100mg甲基红在100ml甲醇中 5． 溴甲酚绿指示剂溶液：溶解100mg溴甲酚绿在100ml甲醇中
6． 硼酸溶液：4%(w/v) 溶解400g硼酸在5-6L热的无离子水中，再加入无离子水到大约9L，
混合。冷却到室温并加入100ml溴甲酚绿指示剂溶液和70ml甲基红指示剂溶液，然后定容到10L。
注释：硼酸试剂调节：在滴定硼酸吸收液时得到正的“空白值”非常重要，配好的硼酸溶
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液应得到0.05-0.15ml HCl的空白读数，如果达不到要求，必须进行调节。硼酸的调节可以使用0.1M NaOH（增加空白）或0.1M HCl（减少空白）。
7． 硼酸溶液：1%,(w/v) 溶解100g硼酸在5-6L热的无离子水中，再加入无离子水到大约9L
并混合。冷却到室温并加入100ml溴甲酚绿指示剂溶液和70ml甲基红指示剂溶液，然后定容到10L。
8． 盐酸标准溶液：0.1000N 二．实验步骤
1. 消化
（1） 接通模块式消化器的电源，加热到420℃。
（2） 称量样品对于称量≥1g量时，记录每一样品重量到mg级；对于＜1.0g量的，记录到
0.1mg级。不要超过1.2g。例如对于蛋白含量很高的样品，称样量大约0.3-0.5g。
（3） 每次测定操作都应该包含一个试剂空白试管，试管中包含有折叠的无氮称量纸。 （4） 每个试管中加入2片片状凯氏铜催化剂。
（5） 用移液分配器加入12ml浓硫酸到每个试管中（对于高脂肪物质（>10% 脂肪）加入
15ml）。可以在这一步暂停，明天再继续。如果冒泡成问题，可以缓慢地加入3ml 30-35%过氧化氢来减少冒泡，加入过氧化氢后应使其反应结束才能继续下一步操作。（消化器必须放置在通风橱中或配备有排废系统。）
（6） 安放隔热板到试管架上，紧密安放烟雾收集管在试管上并把水抽气泵打开到最大，然
后把试管架摆放到已预热的加热模块中。
（7） 10分钟后，关小水抽气泵至酸雾刚好充满排废罩。在试管中应该形成冷凝环。当消化
最初阶段产生的大量二氧化硫烟雾消失后，必须减少真空源以减少硫酸的损失。
（8） 继续消化50分钟，总消化时间大约60分钟
（9） 关掉消化器电源。取出仍然连接着排废罩的试管架放在冷却架上冷却10-20分钟。要
加速冷却，可以用普通吹风机或放在通风橱中并把橱窗门拉下，增加穿过试管的气流。烟雾停止后，移走排气歧管并关闭抽气泵，移开加热挡板。
（10） 继续使试管冷却。建议在蒸馏前手工预稀释样品，带着手套和保护眼睛，小心加入几
毫升无离子水到每个试管中。如果出现喷溅，那是因为试管还太热，需再冷却多几分钟。再加水到各个试管中使体积大约达到80ml（液面应该在试管架两个层板之间的一半左右，这是一个方便易见的停止点）。
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注1：样品消化液必须含有过量的硫酸以防止氨的释出。
注2：如果样品出现固化，把含有稀释消化液的试管放到模块式消化器中小心加热并不时旋摇直至固体溶解。
注3：如果使用配备有蒸汽平衡添加（SAfE）功能的蒸馏装置，手工稀释步骤可以省略，在蒸馏过程中大约80ml无离子水将自动加入。 2． 蒸馏与滴定
在蒸馏装置的储碱罐中存放40%NaOH，调节排放量为50ml。装接含有稀释消化液的试管到蒸馏装置或使用仪器带有的自动稀释功能。
500ml刻度锥形滴定瓶中加入30ml硼酸溶液，加指示剂后，放置在吸收平台上，将冷凝器的管子插到硼酸溶液的液面下。蒸汽蒸馏，到收集约150ml蒸馏液（总体积180ml）后，移开吸收瓶。用标准0.1000N HCl滴定硼酸吸收液到紫红色终点，即溶液返回到粉红色之前的颜色，轻微摆动平台可使终点容易看到。记录HCl的毫升数，至少准确到0.05ml。
注4：使用带自动滴定的蒸馏器时，这一步骤自动进行。
注5：为了避免出现方法上的偏差，盐酸的标准化必须使用与测定样品相同的终点颜色检测系统（指示剂，波长）。 三．注意事项
1．所用的硫酸和氢氧化钠都是高浓度和强腐蚀性，在取放时应戴手套和保护眼睛，不得混合浓酸和氢氧化钠，如果溅到皮肤或眼睛，用大量的水冲洗，寻医看护。消化过程中产生的硫氧化物对呼吸有害。
实验五 饲料脂类测定
脂类包括脂肪和类脂．脂肪是由一分子的甘油(丙三醇)和三分子的脂肪酸构成，故又称为甘油三酯．类脂包括脂肪酸、磷脂，糖脂、固醇、蜡质等。
脂类化合物分子中常含有长碳链或其它非极性基团，即具有疏水性，难溶于水，而易溶于乙醚、石油醚、四氯化碳等非极性溶剂或甲醇、氯仿等弱极性溶剂。由于不同样品的脂类化合物中，碳链的长度和饱和程度以及脂的分子构型等存在某些差异，所以，用不同溶剂作提取剂时，其测定结果也有差异。在实际分析工作中可根据具体情况采用下列分析方法。
一、 索氏提取法
(一) 原理
索氏(Sohlet)法或乙醚萃取法的原理是根据饲料样品中的脂类可溶于有机溶剂如乙醚，通过
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乙醚反复抽提，使溶于乙醚中的脂肪随乙醚流注于盛醚瓶中，由于乙醚和脂肪的沸点不同，控制水浴温度，蒸发去乙醚，盛醚瓶所增加的重量即为该样品的脂肪量。
由于游离脂肪酸、卵磷脂、蜡质、麦角固醇、胆固醇、脂溶性维生素、叶绿素等物质，亦溶于乙醚，故此法所测得脂肪不纯，统称为粗脂肪。
(二) 仪器设备
（1）实验室用植物样品粉碎机或研钵； （2）分样筛：40目；
（3）分析天平：感量0.0001g； （4）电热恒温水浴锅：室温～100℃； （5）恒温烘箱；
（6）索氏脂肪提取器（见图5-1）：100ml或150m1； （7）滤纸或滤纸简：中速．脱脂 （8）脱脂棉线；
（9）干燥器：用氯化钙(干燥级)或变色硅胶为干燥剂。 （三）试剂 乙醚：化学纯 (四)
试样的选取与制备
选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减至500g，粉碎粒度为40目，再用四分法缩减至200g，于密封容器低温或阴凉处保存防止成分变化和变质。
(五) 测定步骤
1．将已洗净的盛醚瓶置于105±2℃的烘箱中烘干30min.，而后取出于干燥器内冷却30min.，称重。再烘干30min.，同样冷却、称重，两次重量之差小于0.001g为恒重。
2．洗净并装置好脂肪提取器(干燥无水)，检查装置是否严密。
3．准确称取试样1～5g（可用测定水分后的试样），置于滤纸筒中或用滤纸包好，用脱脂棉线扎成一定大小的脂肪包(其高度不超过浸提管高度2/3，宽度以能放入即可)。用铅笔编号，置于105±2℃烘箱内烘干2h，取出待用。
4．用镊子将滤纸筒或脂肪包放入浸提管内，加少许乙醚，盛醚瓶中加乙醚60～l00ml。在60～75℃水浴锅（用蒸馏水）上加热，使乙醚回流，回流速度每h 4～6次，约经8～16h，样品中的脂肪即全部提出，或控制乙醚回流次数为每h约10次，共回流约50次（含油高的试样约70次）或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。
5．浸提完毕取出脂肪包，然后让乙醚再回流一次，再开始回收乙醚，直至盛醚瓶中乙醚几
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图5-1 索氏脂肪提取器1－冷凝管，2－浸提管，3－盛醚瓶4－蒸汽管，5－虹吸管
乎全部收完。最后取下盛醚瓶，在水浴上蒸去残余乙醚。用酒精棉擦净瓶外壁。
6．将盛醚瓶置于105土2℃烘箱内烘干1h，取出后于干燥器中冷却20min.，称重。再烘干30min，同样冷却称重，至两次重量之差小于0.001g为恒重。
(六)结果计算 1．计算 粗脂肪(％)=
m2m1×100 m式中：m ——风干试样质量(g)。
m1——已恒重的盛醚瓶质量(g)。
m2——已恒重的浸提后盛醚瓶质量(g)。 2．重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 粗脂肪含量在10%以上(含10%)，允许相对偏差为3％； 粗脂肪含量在10％以下，允许相对偏差为5％。 (七) 注意事项:
1．乙醚为麻醉剂，且能引起消化道中毒，使用时应注意防止其挥发。
2．回收乙醚前应检查脂肪是否抽提完全：调节冷凝管旋塞，接一滴乙醚与玻璃表面皿上，待自然干燥后，检查表面皿上是否有污渍。无污渍则脂肪抽提完全，可进行乙醚回收。
3．回收乙醚前应空蒸一回再进行回收。
4．盛醚瓶放入恒温干燥箱时要保证无乙醚，以防引起爆炸。
二、鲁氏残留法
（一）原理 鲁氏（C.B.Pymkobckий）残留法的原理是用乙醚提取试样后，样品减少的重量即为粗脂肪的含量。
（二）仪器设备
1．实验室用植物样品粉碎机或研钵； 2．分样筛：40目；
3．分析天平：感量0.0001g； 4．电热恒温水浴锅：室温～100℃； 5．恒温烘箱；
6．索氏脂肪提取器：（见图3—6）100ml或150m1； 7．滤纸或滤纸简：中速，脱脂 8．脱脂棉线；
9．干燥器：用氯化钙(干燥级)或变色硅胶为干燥剂。 （三）试剂 乙醚：化学纯
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(四) 试样的选取与制备 选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减至500g，粉碎粒度为40目，再用四分法缩减至200g，于密封容器低温或阴凉处保存防止成分变化和变质。
（五）操作步骤
1．将脱脂滤纸裁成10×10cm2大小，叠成一边不封口的纸包，用铅笔编号，按顺序 排列于培养皿上，置于105土2℃烘箱中烘2h，取出放于干燥器中冷却至室温，分别放入同一称量瓶中称重(W0，g)。
2．将2～5g风干样品(通过40目筛)用小药匙小心装入已经称重的纸包中，封上包口。 按顺序排列于培养皿中．置于105±2℃烘箱中烘3h，取出放入干燥器中冷却至室温，分别放入原称量瓶中．称至恒重(WI，g)。
3．将样品包放入抽提管中，倒入无水乙醚，使之刚超过样品包高度，如图3—6所示连接装置，浸泡过夜．然后将浸泡过样品的无水乙醚放入抽提瓶中，再重新向抽提管中倒入无水乙醚，使之完全浸没样品包．连接装置，接通冷凝水，在70～80℃水浴锅中回流6—8h，回流速度以每分钟20ml左右为宜．抽提完毕，取出样品包，在通风处挥干乙醚．剩余乙醚可进行回收。
4．将样品包仍按原序号排列在培养皿中，置于105±2℃烘箱中烘2h，取出放入干燥器中冷却至室温，再将样品包放原称量瓶中，称至恒重(W2，g)。
(六)结果计算 粗脂肪含量（%）＝
W1W2×100
W1W0式中，W0——滤纸+称量瓶重(g)；
W1——提取前样品包+称量瓶重(g)； W2——提取后样品包+称量瓶重(g)。
上述两种方法都是以乙醚为溶剂的提取方法，其优点是具有较好的准确度和精密度，尤其是测定粗脂肪含量在5% 以下的样品，用此法比较可靠。缺点是费工费时，反复提取需8~16h；另外乙醚不能将样品中的全部脂肪提尽。这是因为部分脂肪常与蛋白质或碳水化合物等非脂肪成分结合。成为结合态脂类，如脂蛋白、糖脂、磷酯等，同时样品也必须是烘干的，因乙醚难以渗入含水样品的组织内部。在烘干样品时，又应考虑到脂肪在高温下易被空气氧化等情况。
实验六 饲料粗纤维测定
粗纤维（crude fiber，CF）是植物细胞壁的主要成分，包括纤维素、半纤维素、木质素等成分。
一 、原理
粗纤维的常规测定法是在公认的强制规定条件下测定。将试样用一定容量和一定浓度的预热硫酸和氢氧化钠溶液相继煮沸消化一定时间，再用乙醇和乙醚除去醚溶物，经高温灼烧扣除矿物
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质的剩余物为粗纤维。当用稀酸处理时，淀粉、果胶和部分半纤维素被溶解；当用稀碱处理时，又可除去蛋白质和部分半纤维素、木质素、脂肪；用乙醇和乙醚处理时，可除去单宁、色素、脂肪、蜡质以及部分蛋白质和戊糖。用这种方法测得的“粗纤维”实际上是以纤维素为主，含有部分半纤维素和木质素的混合物。
二、仪器设备
（1）实验室用样品粉碎机或研钵 （2）分样筛：40目；
（3）分析天平：感量0.0001g；
（4）消煮器：有冷凝球的500ml烧杯，或有冷凝管的锥形瓶； （5）布氏漏斗：直径6cm； （6）抽滤瓶：500~1000ml；
（7）滤布：100支纱的麻绸或200目的尼龙网布； （8）真空抽气机(真空泵)； （9）电热式恒温箱(烘箱)；
（10）干燥器：用氯化钙或变色硅胶作干燥剂；
（11）高温炉(茂福炉)：电加热，有高温计且可控制炉温在550～600℃；
（12）古氏坩埚：30ml，预先加入30ml酸洗石棉悬浮液，再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜；
（13）电炉或电热板。
三、试剂
（1）硫酸 分析纯，0.255±0.005mol/L，每100ml含硫酸1.25g，应用氢氧化钠标准溶液标定；
（2）氢氧化钠 分析纯，0.313±0.005 mol/L，每100ml含氢氧化钠1.25g应用邻苯二甲酸氢钾标定；
（3） 石棉 市售或自制中等长度酸洗石棉置于蒸发皿中，在600℃灼烧16h，用1.25%硫酸溶液浸泡并煮沸30min，过滤并用水洗至中性。同样用1.25%氢氧化钠溶液煮沸30min.，过滤并用少量1.25%硫酸溶液洗一次，再用水洗净，烘干后于600℃灼烧2h，其空白试验结果为每克石棉含粗纤维值小于1mg；
（4）95%乙醇：化学纯； （5）乙醚；化学纯；
（6）正辛醇：分析纯，防泡剂。
四、试样的选取与制备
选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减至500g，粉碎粒度为40目，再用四分法缩减至200g，于密封容器低温或阴凉处保存防止成分变化和变质。
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五、测定步骤
1．称取1～2g试样，准确称至0.0002g，用乙醚脱脂(试样含脂肪量低于1%时可不脱脂．也可用测定脂肪后的试样残渣)放入消煮器。
2．加入煮沸的0.255 mol/L硫酸溶液200ml和1滴正辛醇(防泡剂)．立即加热，使其在1min内沸腾．并连续微沸30min．注意保持硫酸浓度不变(可补加沸蒸馏水)，并避免试样粘贴在液面以上的杯壁。
3．微沸30min后立即停止加热，用铺有滤布的布氏漏斗过滤，将200ml滤液在10min内全部滤净．再用沸蒸馏水反复冲洗残渣，直至滤液不使蓝色石蕊试纸变红为止。
4．取下不溶物，放入原容器中，加入煮沸的0.313 mol/L氢氧化钠溶液，立即加热，使其在1min内沸腾，同样准确微沸30min。
5．立即在铺有石棉的古氏坩埚上抽滤．先用25ml硫酸溶液冲洗。再用沸蒸馏水反复冲洗残渣，直至滤液不使红色石蕊试纸变蓝为止。
6．用洗瓶将滤布上的残留物洗100ml烧杯中，再倒入铺好石棉的古氏坩埚中。用15ml乙醇冲洗残渣，滤净后再用15ml乙醚洗涤（脱脂样品可不用乙醚洗涤）将古氏坩埚及残渣放入105±2℃烘箱中烘干5h（或130±2℃烘干2h），在干燥器中冷却30min，直称至恒重(两次称重之差小于0.001g)．再将古氏坩埚置于电炉上炭化，然后移入550±25℃的高温炉中灼烧30min，在干燥器中冷却30min，准确称重，直至恒重。
六、结果计算
1．计算公式： 粗纤维(%) =
W1W2×100 W式中：W1——105±2℃烘干后坩埚及试样残渣重(g)； W2——550±25℃灼烧后坩埚及试样灰分重(g)； W——样品(未脱脂时)重量(g)。 2．重复性
每个试样应取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 粗纤维含量在10%以下，允许相差(绝对值)为0.4% 粗纤维含量在10％以上，允许相对偏差为4%。
说明：①酸和碱处理时应注意准确微沸30min；②在冲洗过程中应避免残渣的损失。
附：粗纤维测定仪（Fibertec 2010）
Fibertec 2010&M6纤维分析仪可进行粗纤维、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）
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和酸性洗涤木质素（ADL）的测定。 一．试剂
1． 丙酮（分析纯） 2． 正辛醇（消泡剂）
3． Celite 545，酸洗硅藻土或Celite 545 AW或其它等价物。确定Celite在使用前是经过酸洗
涤的并于525℃±15℃下灰化的。
4． 坩埚清洗液：铬酸洗液，溶解120g Na2Cr2O7·2H2O在1000ml蒸馏水中，小心地加入1600ml
的浓硫酸后混合；或者使用15~20%的盐酸溶液。 5． 酸性洗涤纤维(ADF)
5.1 酸性洗涤剂(ADS)（含有CTAB 的1.00N H2SO4）：称取49.04g H2SO4(试剂级)加入装有400ml蒸馏水的1000ml容量瓶中，用20℃左右的蒸馏水定容（如需要通过滴定来检查并调整浓度）。加入20g CTAB（十六烷基三甲基溴化胺）(分析纯)，充分溶解。
5.2酸性洗涤剂(ADS)(改良法)：称取49.04g H2SO4 (试剂级)加入装有400ml蒸馏水的1000ml 容量瓶中，用20℃左右的蒸馏水定容。加入10g CTAB (分析纯)，充分溶解。
6．酸性洗涤木质素（ADL）
72%硫酸：通过以下公式可计算配制1000ml溶液所需的酸的克数及水的量
10098.0812 所需酸的克数 =
H2SO4浓度(％) 所需水克数=(1000×1.634*)－所用酸克数 *为72％H2SO4的密度 7粗纤维(CF)
7.1 1.25%硫酸：称取12.5g浓硫酸加入装有大约400ml去离子水的1000ml容量瓶中，并用去离子水定容到1000ml。
7.2 1.25%氢氧化钠：溶解12.5g氢氧化钠到700ml去离子水中，再转移到1000ml容量瓶中，并用去离子水定容到刻度。
或 1.25%氢氧化钾：溶解12.5g氢氧化钾到700ml去离子水中，再转移到1000ml容量瓶中，并用去离子水定容到刻度。
8. 中性洗涤纤维（NDF) 8.1 热稳定α-淀粉酶试剂
8.2中性洗涤剂（NDS）：称取18.61gEDTA（乙二胺四乙酸二钠，C10H14N2Na2O8·2H 2O）和6.81g十水硼酸钠(Na2B4O7·10H2)放入烧杯中，加适量蒸馏水加热直至溶解。加入30g十二烷基磺酸钠，10ml三甘醇(C6H14O4)和4.56g磷酸氢二钠(Na2 HPO4 )。加入蒸馏水加热直至溶解。混匀并定容至1000ml。检查PH值，应该在6.9~7.1范围内。 二. 操作步骤 1. 样品前处理 1.1固体样品
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固体样品一般用粉碎的方法处理。建议粉碎的样品必须通过1.0mm的筛网。 1.2 半固体样品
根据具体的样品类型可用匀浆、液化或球磨的方法处理以获得适当的分析样品。很多情况下，简单的乳钵和研钵就可以很好处理样品了。假如可能，在磨碎前先干燥样品。均质后的高脂肪、高水分样品，在分析前需要进一步处理。
1.3 高脂肪含量的样品
如果样品的脂肪含量高于10%，粉碎样品可能相当困难，这种样品最好用专门处理高脂肪样品的研磨机来处理，如用福斯分析公司的Knifetec刀式磨，或者先脱脂再粉碎。
对于粗纤维检测来说，假如样品脂肪含量低于1％，没有必要再脱脂。脂肪含量处于1～10％之间时，推荐脱脂。假如脂肪含量大于10％，在分析前必须脱脂。
如样品中含有无法直接浸提出来的脂肪成分，可以在酸处理之后再进行浸提来去除这部分成分。
每个样品用25ml丙酮反复三次在Fibertec冷浸提单元上脱脂。静置5min后过滤。 1.4高碳酸盐含量的样品
对于粗纤维测定，如果碳酸盐含量高于5％，则需除去碳酸盐，因为碳酸盐会降低硫酸的浓度。可使用以下步骤去除碳酸根，在室温下每个样品中添加25ml 0.5N HCl于Fibertec热浸提单元上，静置5min后用水洗涤并过滤。 1.5样品重
必须采用精度达到0.1mg的分析天平来称量样品。样品的实际重量绝不可以超过给定方法中的量，这是为了确保在浸提过程中有适当的试剂活力。 2. 操作细节 2.1坩埚的清洗
A：用热水冲尽可能移除坩埚中残渣，并用刷子刷。
B：将坩埚浸泡于铬酸洗液中，过夜。用水冲洗，再放于105℃烘箱中大约1h。或者浸泡于15-20％盐酸中直至没有残渣残留。用水冲洗，再放105℃烘箱中大约1h。逐渐升高至525℃±15℃下过夜灰化。等待马弗炉温度降至250℃后，再将坩埚由马弗炉移至干燥器中冷却。使用3-4次后，将坩埚倒置在抽滤装置上，用接近沸腾的水通过真空泵来冲洗。
C：在525℃± 15℃下灰化至少需要3个h。等待马弗炉温度降至250℃下时，再移出坩埚。 2.2 干燥
干燥带有残渣的坩埚时，使用70℃的真空烘箱过夜或于105℃ ± 2℃鼓风烘箱中干燥至少5个h。在干燥器中冷却并精确称重至0.1mg。通过减去烘干后的硅藻土加坩埚重得到残渣的重量。 2.3灰化
在525℃±15℃下灰化带有残渣的坩埚至少3h。待马弗炉温度降至250℃下时，再移出坩埚。在干燥器中冷却并精确称重至0.1mg。通过减去灰化后的硅藻土加坩埚重得到粗纤维的重量。
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玻璃坩埚可以耐受540℃的高温，但湿的坩埚不得放入热的马弗炉，否则将爆裂。尽可能把坩埚放入冷的马弗炉中，然后再慢慢加热升温。也可以把热的马弗炉的炉门打开，然后逐渐地把坩埚移入马弗炉中。 3. 分析步骤
3.1 将预干燥的坩埚放置于天平上去皮。称取1000±2mg的硅藻土(盐)。称取样品精确到1000 ± 2mg。如果样品足够均匀并具有代表性，可以使用更少量的样品来加快抽滤速度。
3.2 如果样品脂肪或碳酸盐含量过高，在分析前应使用Fibertec冷浸提单元按照以下第4节处理。
3.3 Fibertec 热浸提单元操作步骤 A：按下主电源按钮 B：按R1键加热试剂
C：使用坩埚夹插入坩埚，拉下手柄，使坩埚卡在Fibertec热浸提单元加热辐射器前方。保证安全地闭合
D：在坩埚的正前方放上挡热板 E：加入预加热好的试剂到每一浸提柱中
F：加入2～4滴正辛醇以抑止泡沫，将加热控制器调节至满功率加热。当试剂开始沸腾，调节加热控制器以保持微沸
G：按开始键
H：浸提结束时，关闭加热器 I：按动\"vacuum\" 键，开始抽滤
有时在同一时间内，只过滤一个样品能得到更高的效率。假如需要，可以使用反向压力来辅助过滤。按\"PRESSURE\"键，将阀门打向pressure位置，然后再重新回到vacuum位置。注意！如Fibertec热浸提单元与Fibertec 冷浸提单元系通过同一真空泵连接，抽滤时需关闭Fibertec 冷浸提单元的阀门
J： 使用反吹功能冲开样品
K： 假如方法规定，需重复进行浸提操作两次或两次以上 L：拉下手柄,放松坩埚
M：使用坩埚夹将坩埚移至Fibertec冷浸提单元 3.4冷浸提单元操作步骤
A：将坩埚装上Fibertec冷浸提单元，关闭阀门。
B：加入相应溶剂，浸提并通过将阀门打至\"vacuum\"位置抽滤溶剂。
C：移出坩埚并将其转移至坩埚架上。待冷至室温直至所有有机试剂都蒸发掉，否则在坩埚干燥时有燃烧的风险。
D：将坩埚置于105℃±2℃干燥5h或130℃±2℃下干燥2h。
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E：将坩埚在干燥器中冷却至室温后称重，精确到0.1mg。
F：将坩埚在525℃±15℃下灰化至少3 h。参照坩埚包装盒上的指示小心地加热及冷却坩埚。 G：在干燥器中冷却至室温后称重，精确到0.1mg
注意！停止使用热浸提或冷浸提单元时，应将阀门置于REST位置。 5．计算
粗纤维（%）=
M1M2×100 M M1为烘干后坩埚及试样的残渣重；M2为灼烧后坩埚及试样的残渣重；M为试样(未脱
脂)质量.
实验七 饲料中无氮浸出物（NFE）计算—差值计算
饲料中无氮浸出物（NFE）主要由易被动物利用的淀粉、菊糖、双糖、单糖等可溶性碳水化合物组成。常规饲料分析一般不直接分析饲料中无氮浸出物的含量，仅根据饲料中其他养分的分析结果，按下式间接计算求得：
无氮浸出物(%)＝100%－[水分(%)+灰分(%)+粗蛋白质(%)+粗脂肪(%)+粗纤维(%)] 或 无氮浸出物(%)＝干物质(%)－[灰分(%)+粗蛋白质(%)+粗脂肪(%)+粗纤维(%)]
饲料样品具有风干、绝干及原样等不同基础表示分析结果，因此在计算无氮浸出物，各养分的质量分数应换算在同一基础上。此外，动物性饲料可不计算此项。
一、饲料养分的表示基础与换算
1．饲料养分的表示基础
（1）原样基础 有时称为鲜样基础，是指未经处理的按采集时的原来状态所测定的养分质量分数。以这种基础表示各种饲料的养分质量分数，因干物质含量不同，变异很大，不易比较。
（2）风干基础 空气中自然存放基础或“假定干物质基础”，一般干物质含量为88%左右。这种基础有助于比较不同水分含量的饲料，常规饲料分析绝大多数是在风干状态下进行分析的，大多数饲料以风干状态饲喂，所以风干基础比较实用。
（3）绝干基础（干物质基础，DM） 无水状态或100%的干物质状态。用于比较不同水分含量的饲料。绝干基础排除了因水分变化带来的差异。
2．不同基础表示的饲料养分换算 可通过下面两种方法进行换算：
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（1）应用下列比率关系，可将饲料成分的一种基础表示数值，换算为另一种基础表示的数值。
饲料中任一成分用任一基础表示的含量%该饲料中成分用另一基础表示的含量%该饲料在同一基础的干物质含量%饲料在同一基础的干物质含量%
例如：一种饲料其鲜样中含水75%，含粗蛋白质4.0%，计算以风干基础（干物质＝88%）表示的粗蛋白质含量。
则 4：(100-75)＝X：88 X＝14.08％ 换算为以干物质为基础时的粗蛋白质含量则为： 4：(100-75)＝X：100 X＝16.00％
如果样品是新鲜饲料，首先计算总水分，得出新鲜样品的干物质含量，再将测得风干样品中各种养分含量的结果换算成新鲜饲料中各种养分含量。新鲜饲料中总水分含量按下式计算：
新鲜饲料中总水分（%）＝A％＋
(100A)B%
100式中：A为测得的初水分含量，%；B为测得的吸附水水分含量，%。 （2）由风干基础的结果换算成以原样为基础的某种养分含量（X）公式：
X＝W%(100A)
100式中：X为以原样基础表示的某种养分质量分数，%；W为以风干基础表示的某种养分质量百分数，%；A为测得的初水分质量百分数，%。
由风干基础的结果换算成以绝干为基础的某种养分含量（X）公式：
X＝100W%
100B式中：X为以绝干基础表示的某种养分质量分数，%；W为以风干基础表示的某种养分质量分数，%；B为测得的吸附水质量分数，%。
例：新鲜苜蓿初水分74%，吸附水9%，风干苜蓿粗蛋白质含量16%。试计算①新鲜苜蓿的总水分？②新鲜苜蓿粗蛋白质含量？③绝干苜蓿中粗蛋白质含量？
解：新鲜苜蓿的总水分（%）＝74％＋
(10074)9%＝76.3％
100(10074)16%新鲜苜蓿粗蛋白质含量(%)＝＝4.2%
100 26
干苜蓿中粗蛋白质含量(%)＝
10016%＝17.6%
10093.如果以含水量相同为基础进行比较折算的方法 例如：麸皮和聚合草原样中各种养分含量（%）见表2 表2 饲料原样中概略养分含量 麸 皮 聚合草
水分 11.1 87.6
粗蛋白质
12.6 2.9
粗脂肪 3.2 0.6
粗纤维 11.7 1.8
粗灰分
5.2 2.2
无氮浸出物
56.2 4.9
为使麸皮和聚合草在水分含量相同的基础上比较两者的的各种养分含量，以麸皮为比较
标准（基准饲料）计算出聚合草在与麸皮含水量（11.1%）相同条件下的养分换算系数。即
养分换算系数＝
10011.1＝7.17
10087.6用7.17分别乘以聚合草在含水量87.6%（即干物质含量为12.4%）情况下的各种养分含量，就得出聚合草和麸皮含水分量相同（11.%）时的各种养分含量。计算结果如表3：
表3 饲料风干物质中养分含量比较（%）
麸 皮 聚合草
水分 11.1 11.1
粗蛋白质 12.6 20.8
粗脂肪 3.2 4.3
粗纤维 11.7 12.9
粗灰分 5.2 15.8
无氮浸出物 56.2 35.1
实验八 饲料及产品的热值测定
能量是动物一切机能活动的基础。动物为了维持正常的生命活动和生产畜产品，首先必须满足其对能量的需求。评定饲料的能量价值和研究动物对能量的需要量是动物营养学的重要任务之一。根据饲料能量在动物体内的转化规律，可以把饲料能量分为总能和有效能两部分。能够被动物有效利用的那部分能量称为有效能，如消化能、代谢能、净能等。准确测定饲料或粪、尿、动物产品的热值是研究动物能量代谢的基本方法。本章将系统介绍饲料热值的测定原理、仪器设备、测定步骤和结果计算。
一、测定原理
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饲料中的热能即饲料的燃烧热，是饲料中的有机化合物完全氧化后所释放出的热量，也称总能。单位质量该物质的燃烧热即为该物质的热价，通常以kJ/g或MJ/kg为单位。
根据热力学第一定律，一个热化学反应，只要其开始与终末状态一定，则反应的热效应就一定,这使我们测定各种物质的燃烧热变得有意义。有机物差不多均能氧化完全，并且反应很快，因此准确测定燃烧热就有了可能。由所测得的燃烧热还可以计算反应的热效应和化合物的生成热。
专门用于测定热量的仪器称为热量计，包括恒温式热量计和绝热式热量计两大类。我国目前使用较多的是恒温氧弹式热量计及其改进型，其测定原理是：将待测样品制备成一定质量的测定试样，装于充有2.5~3MPa纯氧氧弹中进行燃烧，燃烧所放出的热量被氧弹周围已知质量的蒸馏水及整个热量计体系吸收，温度上升。根据燃烧前后温度的变化和热量计的热容量，即可算出该样品所含的热量。
二、仪器、试剂及必需物品
（一）仪器
（1）氧弹式热量计（GR-3500型，长沙仪器厂），1套；
（2）氧气钢瓶（附氧气表）及支架（氧气纯度99.5%，不允许使用电解氧），1套； （3）分析天平，感量0.1mg，1台； （4）精密天平，感量0.5g，1台；
（5）引火丝，直径0.1mm左右的铝、铁、铜、镍铬丝或其他已知热值的金属丝若干； （6）碱式滴定管，1支； （7）量筒（10ml），1个； （8）烧杯（250ml），1个。 （二）试剂
蒸馏水、苯甲酸（保证级试剂或分析纯）、0.1mol/L氢氧化钠标准溶液、10g/L酚酞指示剂
三、氧弹式热量计结构简介
氧弹式热量计型号很多，自动化程度越来越高，但基本上都是在GR-3500型的基础上发展起来的。下面以GR-3500型氧弹式热量计为例，详细介绍其结构及操作步骤。
氧弹式热量计的主体部分主要由氧弹、金属内筒和外筒组成。此外还有贝克曼温度计、电动搅拌器、中心控制箱、压样机、弹头座、氧气瓶、氧气减压阀及氧气过滤器等附件。
装置
（一） 氧弹
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氧弹是热量计的核心，包括弹头与弹体两部分，由耐酸的不锈钢制成，容积约300ml。 弹体为一厚壁圆筒，筒口有螺纹，借螺帽使弹头与弹体旋紧。螺帽与弹头间嵌有耐酸橡皮圈。当试样烧烧时，弹内压力增加，迫使弹头压紧螺帽，使其间的橡皮垫圈向侧面膨胀而与弹体筒口壁密合。弹内压力越大，则气密性也越严。
弹头上有进气阀、放气阀和电极栓。进气阀在弹头内有止围阀，停止充氧后，由于弹体内压力增大，使止围阀上顶防止氧气逸出。燃烧后的弹内气体可通过放气阀排出。进气阀下连一金属进气管，可同时作充氧和电极用。氧气由进气阀经进气管充入弹体。弹头上还另有一独立电极（电极栓），向下有一个金属棒与进气管一起构成两个电极。金属棒上装有坩埚架，用来放置坩埚。试样置于坩埚内，通电后由连在两电极间的引火丝点燃样品。进气管上固定有遮板，防止试样燃烧时火焰直接喷向弹头，并使产生的热流经遮板反射后，较均匀地分布于氧弹内。
GR-3500型氧弹式热量计氧弹的纵剖面示意图如图4－2所示。 （二） 外筒与内筒
外筒是一铜制的双壁套筒，为热量计的隔热装置。实验时由注水口注满水，通过套筒搅拌器，使筒内水温均匀，形成恒温环境。注水口用橡皮塞固定一支普通温度计，用来测量外筒水温。
内筒是一个双壁镀镍的铜制容器，呈梨形。实验时，内装一定质量的蒸馏水，置于外筒中央的绝热支架上，氧弹放在其中。
（三） 搅拌装置
由搅拌器和搅拌马达组成。内、外筒搅拌器由同一搅拌马达同步驱动。内筒搅拌器可拆卸，便于实验操作。外筒搅拌转速为300r/min；内筒为500 r/min。通过搅拌系统的运动，加速水的循环，使水的温度很快均匀一致。
（四） 测温装置
GR-3500型氧弹式热量计测温装置包括贝克曼温度计及其固定支架、振动器、放大镜、照明灯等。贝克曼温度计为精密的测温仪器，没有固定的度数，只用以测量温度差。温度计上最小刻度为0.01℃，通过放大镜可估计到0.001℃。温度计的刻度范围很小，仅0~5℃或0~6℃。温度计一端有一回线形储备泡，以储存多余的水银，通过调节贮汞量可使温度计在0~50℃温度范围内使用。
振动器、放大镜、照明灯都是帮助准确读取温度计度数之用的。温度计水银柱在运动时，与管壁发生摩擦而产生水银停滞现象，影响测温的正确性。为消除这一影响，GR-3500型氧弹式热量计装有振动器，通过电磁作用定时振动，消除水银的停滞现象。
（五） 引燃装置与控制箱
引燃装置由控制箱上的点火开关控制，点火电压24V，通过调节电流旋钮，通电后引火丝熔断，引燃试样。使引火丝熔断的时间不超过1s。
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控制箱为一配电装置，可控制点火、振动、总电源、指示灯等。 （六） 充氧装置
由氧气瓶、氧气减压阀、氧气过滤器、导管及氧弹进气阀组成。氧气减压阀一端直接与氧气钢瓶相连，另一端接氧气过滤器或氧弹进气阀。试验时氧弹仅需（2.5±0.5）MPa压力，而一般氧气瓶的压力都很高，必须安装减压装置。减压阀有2个压力表，一个表指示氧气瓶内压力，另一个表指示工作用的压力。氧弹充氧时所需的压力可通过调整减压阀的手扭来控制。
氧气过滤器为一镀铬合金钢制成的厚壁圆筒，开端有塑料垫作密封圈，用螺帽扭紧，故有良好的密闭性。筒内有吸水的硅胶和吸二氧化碳的钠石灰，成分各占一半。降压的氧气通过过滤器可除去可能存在的二氧化碳、水及其他酸性气体杂质，不用时将螺帽扭紧，以防硅胶吸水而溶化。过滤剂每隔90~180d应更换一次。
充氧装置各连接部分，禁止使用润滑油。新仪器在使用前或任一连接部分被油类污染，必须用汽油或酒精洗净并吸干，以免通氧时发生意外的爆炸。
（七） 压样机
其用途是将粉状试样压成圆片状。使用时用螺钉将压样机固定使用，如长期不用时，应在易锈的地方涂上凡士林以防生锈。
（八） 弹头座
专供放置弹头用，便于连接引火丝、取放坩埚等操作。
四、对测热室的要求
测热工作应在恒温条件下进行，否则所得结果将引入误差，因此要求测热室： （1）设有一单独房间，不得在同房间内同时进行其他试验项目。
（2）室温应尽量保持恒定，每次测定室温变化不应超过1℃。通常室温以不超出15~30℃范围为宜。
（3）室内应无强烈的空气对流，不应有强烈的热源和风扇等，试验过程中应避免开启门窗。 （4）测热室最好朝北，以避免阳光照射，否则热量计应放在不受阳光直射的地方。 （5）当仪器新搬入室内时，应放置适当时间，待仪器温度与室温平衡时，方可开始试验工作。
五、操作步骤
（一） 准备工作
测定前应擦净氧弹各部污物及油渍，以防试验时发生危险。氧气瓶应放在阴凉安全处，防止滑倒。检查热量计各部件是否齐全完好。
1．内、外筒水的准备 从外筒的注水口加入水（自来水等）至离水筒上缘1.5cm左右，放
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置1天以上，待水温与室温一致时（温差小于0.5℃）才能使用。通常外筒水不需经常更换。如热量计长期不用，应将水筒中的水全部放尽。
称量内筒水。先称取干净的空内筒质量，放入3kg左右的蒸馏水，调节内筒水温，使其低于外筒水温0.5~0.7℃(用普通温度计测量)，然后再准确称量，使内筒水的质量为3kg（GR-3500型），准确至0.1~0.5g。如不具备称量条件，可用容量瓶量取，但必须根据温度变化进行校正。
测定发热量过低的试样时，内筒水的初始温度不要求一定要低于外筒温度，只要终点温度能超过外筒温度0.5~1.0℃，以使终点时温度有明显下降即可。
注意：每次试验时的用水量应与标定仪器热容量时的用水量一致。
2．压样、称样、连接引火丝 先把坩埚清洗干净，除去残渣，在电炉上600℃温度下灼烧3~4min，放入干燥器中备用。取1~1.5g风干饲料样品（经粉碎过40目筛），用压样机压成片状，然后置于已知质量的备用坩埚中称重（准确至0.0001g）。样品的多少以测定的温度上升不高于3~4℃为准，最好以1~1.5℃左右为宜。一般样品块的高度不要超过坩埚的高度。此外，在称量样品的同时，应测定样品的含水量，以便换算成绝干基础的热价。
量取10cm引火丝并准确称量（一般可量取10根以上引火丝，一次称重，取其平均值作为每根的质量），可以根据引火丝的热价换算成每厘米长度该引火丝的热值。置氧弹于弹头座上，将盛有样品的坩埚置于弹头的坩埚支架上，将引火丝固定在两个电极上，调节下垂的引火丝使之与试样接触，或保持1mm~2mm微小距离（对易燃或易飞溅的试样），并注意切勿使引火丝接触坩埚，以免形成短路，导致烧毁坩埚或支架。同时还应注意防止两电极间以及坩埚同另一电极间的短路。
3．加水及充氧 在弹筒中加入10ml蒸馏水，用来吸收燃烧过程中产生的N2O5与SO3气体，形成硝酸和硫酸，以便在计算样品实际发热量时予以扣除。加入的水量应与测定热量计热容量时相一致，可以用量筒量取。
将装好引火丝和坩埚的氧弹头小心移到弹体上，用螺帽将弹头与弹体慢慢扭紧，注意避免坩埚和点火丝的位置因受震动而改变。取下进气阀的螺母，拧上连接氧气瓶的导管接头（注意不要过分用力，以免磨损造成漏气），打开放气阀，往氧弹内缓缓充入氧气，先充氧约0.49MPa，使氧弹内空气排尽。然后关闭放气阀，调节减压阀，使充氧压力逐渐增至2.49~2.96MPa，保持半分钟左右。当氧气钢瓶中氧气压力不足0.5MPa时，充氧时间应适当延长，不足0.4MPa时，应更换新的钢瓶氧气。
4．调整准备好贝克曼温度计。
5．热量计的安装 把调好水温，准确称量好水的内筒放在外筒的绝缘支架上，再把充好氧的氧弹小心地放入内筒，注意不要使水损失，以免影响试验的准确性。加入的水应淹到氧弹进气阀螺帽高度的2/3处。检查氧弹的气密性，如有气泡出现，表明氧弹漏气，应找出原因，加以纠
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正，重新操作。然后插好电极，装上搅拌器，盖好外筒盖，安上贝克曼温度计，并使温度计水银球中心位于氧弹高度1/2处。温度计和搅拌器均不得接触氧弹和内筒。
一切准确就绪，先检查一下控制箱上的点火开火是否处于关的位置，然后打开总电源、振动、记时等开关，开动搅拌器，搅拌3~5min后开始测定。
（二） 测定工作
全部测定工作分为3期，燃烧前期、燃烧中期、燃烧后期。
1．燃烧前期也称初期。是试样燃烧之前的阶段，用以了解热由外筒传入内筒的速率。搅拌器开动3min~5min后，用放大镜观测内筒水温变化，待温度上升，几乎恒定时，开始读取温度，定为初期起点或初期初温。然后每隔1min读取温度一次，共5min读取6个数值，最后一次读取的温度称为初期末温。读温应精确至0.001℃。
读取温度时，应使视线、放大镜的中线和温度计水银柱表面位于同一水平上，将温度计上最小刻度通过放大镜估计成10个相等部分。读取温度值的位数如下：每半分钟的温度升高大于0.5℃
实验九 饲料中钙的测定（高锰酸钾法）
饲料中钙的测定方法通常有三种：高锰酸钾法、EDTA络合滴定法和原子吸收分光光度法。
其中，高锰酸钾法准确度高、重复性好，为仲裁法，但操作繁琐、费时、终点难判，且高锰酸钾在热酸性溶液中易分解。EDTA络合滴定法操作简便、快速，适合于大批样品的测定。原子吸收分光光度法干扰少、灵敏度高、简便快速，但仪器设备昂贵，无法普及。
一、测定原理
将试样有机物破坏，钙变成溶于水的离子，并与盐酸反应生成氯化钙，然后在溶液中加入草酸铵溶液，使钙成为草酸钙白色沉淀，用硫酸溶液溶解草酸钙，再用高锰酸钾标准溶液滴定草酸根离子。根据高锰酸钾标准溶液的用量，可计算出试样中钙含量。
主要化学反应式如下：
CaCl2＋（NH4）2C2O4 → CaC2O4↓＋ 2NH4Cl
CaC2O4＋H2SO4 → CaSO4 ＋ H2C2O4 2KMnO4＋5H2C2O4＋3H2SO4 → 10CO2↑＋2MnSO4＋8H2O＋K2SO4
二、仪器设备
1．实验室用样品粉碎机或研钵。 2．分析筛：40目。
3．分析天平：感量0.0001ｇ。
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4．高温炉：可控制温度在（550±20℃）。 5．坩埚：瓷质。 6．容量瓶：100ml。
7．滴定管：酸式，25或50ml。 8．玻璃漏斗：6cm直径。 9．定量滤纸：中速，7cm～9cm。 10．移液管：10，20ml。 11．烧杯：200ml。
12．凯氏烧瓶：250或500ml。
三、试剂及配制
1．盐酸溶液：1∶3（V/V）。 2．硫酸溶液：1∶3（V/V）。 3．氨水溶液：1∶1（V/V）。 4．42g·L
－1
草酸铵溶液：溶解42g分析纯草酸铵溶于水中，稀释至1000ml。
5．甲基红指示剂（1g·L-1）：0.1ｇ分析纯甲基红溶于100ml 95％乙醇中。 6．硝酸。
7．氨水溶液：1∶50（V∶V）。
8．高锰酸钾标准溶液：C（1/5KMnO4）＝0.05mol·L-1。
（1）配制 称取高锰酸钾约1.6ｇ，溶于800ml蒸馏水中，煮沸10min，再用水稀释至1000ml，冷却后置于暗处保存2周，用烧结玻璃滤器过滤，保存于棕色瓶中。
注：过滤高锰酸钾溶液所用的玻璃滤器预先应以同样的高锰酸钾溶液缓缓煮沸5min.，收集瓶也要用此高锰酸钾溶液洗涤2～3次。
（2）标定 称取于105～110℃烘至恒重的基准物草酸钠约0.1g，称准至0.0001g。溶于50ml硫酸溶液中，将此溶液加热至75～85℃。用配制好的高锰酸钾溶液滴定。溶液呈现粉红色且1min不褪色为终点，滴定结束时，溶液温度在60℃以上。同时做空白试验。
高锰酸钾标准溶液浓度（C）按下式计算：
mC（1/5KMnO4）＝
(VV0)0.067式中 ：C（1/5KMnO4）为高锰酸钾标准溶液的浓度，mol·Ｌ-1；m为草酸钠的质量，g；V为高锰酸钾溶液的用量，ml；V0为空白试验高锰酸钾溶液的用量，ml；0.0670为与1.00ml高锰酸钾标准溶液[C(1/5KMnO4)＝1.000 mol·Ｌ-1]相当的以克表示的草酸钠的质量。
四、测定步骤
1．试样分解
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（1）干法：称取试样2～5g于坩埚中，准确至0.0002g,在电炉上低温炭化至无烟为止,再将其放入高温炉于550±20℃下灼烧3ｈ。在盛有灰分的坩埚中加入1∶3盐酸溶液10ml和浓硝酸数滴，小心煮沸。将此溶液转入100ml容量瓶中，并以热蒸馏水洗涤坩埚及漏斗中滤纸，冷却至室温后，定容，摇匀，为试样分解液。
（2）湿法（用无机物或液体饲料）：称取试样2～5g于凯氏烧瓶中，准确至0.0002g，加入硝酸（化学纯)10ml,加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入70%～72%高氯酸10ml，小心煮沸至无色，不得蒸干（危险！）。冷却后加水50ml，并煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入100ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，为试样分解液。
2．试样的测定
（1）草酸钙的沉淀及其洗涤：用移液管准确吸取试样液10～20ml（含钙量为20mg左右）于烧杯中，加水100ml，甲基红指示剂2滴，滴加1∶1氨水溶液至溶液由红变成橙色，再滴加1∶3盐酸溶液至溶液恰好变红色（pH=2.5～3.0）为止。小心煮沸，慢慢滴加热草酸铵溶液10ml，且不断搅拌。若溶液由红变橙色，还应补滴1：3盐酸溶液至红色，煮沸数分钟后，放置过夜使沉淀陈化（或在水浴上加热2h）。
用滤纸过滤，用1∶50的氨水溶液洗沉淀6～8次，至无草酸根离子为止（用试管接取滤液2～3毫升，加1∶3硫酸溶液数滴，加热至80℃，加高锰酸钾溶液1滴，溶液呈微红色，且30ｓ不褪色）。
（2）沉淀的溶解与滴定；将沉淀和滤纸转移入原烧杯中，加1∶3硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75～85℃，立即用0.05mol·L-1高锰酸钾标准溶液滴定至溶液呈微红色，且30ｓ不褪色为终点。
（3）空白：在干净烧杯中加滤纸1张，1∶3硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75～85℃后，用高锰酸钾标准溶液滴至微红色且30s不褪色为终点。
五、结果的计算与表述
1．结果的计算
测定结果按下式计算：
(V3V0)c0.02(V3V0)c2V1X（%）＝ ×100＝×
V2mV2mV1式中：
X为以质量分数表示的钙含量，%； ｍ为试样质量，ｇ；
Ｖ１为样品灰化液定容体积，ｍL； Ｖ２为测定钙时样品溶液移取用量，ｍL；
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Ｖ３为滴定时消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ｍL； Ｖ０为空白滴定消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ｍL； C 为高锰酸钾标准溶液浓度，mol·Ｌ-1；
0.02为与1.00ml高锰酸钾标准溶液［C（1/5KMnO4）＝1.00mol·Ｌ-1］相当的以克表示的钙的质量。 2．结果表示
每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果。 3．允许差
含钙量在5%以上，允许相对偏差3%；含钙量在5%～1%时，允许相对偏差5%；含钙量在1%以下，允许相对偏差10%。
六、注意事项
1．高锰酸钾溶液浓度不稳定，至少每月需要标定１次。
2．每种滤纸空白值不同，消耗高锰酸钾标准溶液的用量不同，至少每盒滤纸做一次空白测定。
3．洗涤草酸钙沉淀时，必须沿滤纸边缘向下洗，使沉淀集中于滤纸中心，以免损失。每次洗涤过滤时，都必须等上次洗涤液完全滤净后再加，每次洗涤不得超过漏斗体积的2/3。
附：乙二胺四乙酸二钠（EDTA）络合滴定快速测钙法
一、测定原理
将试样中有机物破坏，使钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中，以钙黄绿素为指示剂，用EDTA 标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。
二、仪器设备
同高锰酸钾法。 三、试剂及配制 1．盐酸羟胺（分析纯）。
2．三乙醇胺溶液：分析纯，分析纯，1∶1水溶液（V∶V）。 3．乙二胺溶液：分析纯，1∶1水溶液（V∶V）。 4．盐酸水溶液（GB622）：1∶3水溶液（V∶V）。
5．钙黄指示剂：00.1ｇ钙黄绿素与0.13ｇ甲基百里香酚蓝，5ｇ氯化钾研细混匀，贮存磨口
35
瓶中。
6．氢氧化钾溶液（200ｇ·L-1）：称取20g氢氧化钾溶于100ml水中。 7．孔雀绿指示剂（1ｇ·Ｌ-1）：0.1ｇ指示剂溶于100ｍL蒸馏水。
8．淀粉溶液（10ｇ·Ｌ-1）：称取1ｇ可溶性淀粉于200ｍL烧杯中加5ｍL水浸湿，加95ｍL沸水搅匀，煮沸，冷却备用（现配现用）。
9．钙标准溶液（0.0001g·ml1）：称取2.4974g于105～110℃干燥3h的基准物碳酸钙，溶于40ml盐酸水溶液中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000ml容量瓶中，稀释至刻度。
10．乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准滴定溶液（0.01mol·L-1）：
（1）配制：准确称取分析纯乙二胺乙酸二钠盐3.8ｇ入200ml烧杯中，加200ml水，加热溶解冷却后转至1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。
（2）标定：含钙1ｍｇ液10ｍL品测定法进行。
（3）计算：EDTA滴定溶液对钙的滴定度可按下式计算：
－
T＝V
V0式中：T为EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度，g·ml-1；
V0为EDTA标准滴定溶液的消耗体积，ml；
V为所取钙标准溶液的体积，ml；
ρ为钙标准溶液的质量浓度，ｇ·ml-1；
四、测定步骤
1．试样分解 同高锰酸钾法。
2．测定 准确吸取试样分解液5～25ml（含钙量2～25mg）于150ml三角瓶中，蒸馏水50ml，10ｇ·Ｌ-1淀粉溶液10ml、三乙醇胺溶液2ml、乙二胺溶液1ml，每加完一种试剂要充分摇匀，然后加孔雀石绿指示剂1滴，摇匀，滴加200g·Ｌ
－1
氢氧化钾溶液至无色，再加氢氧化钾溶液10
ｍL，加0.1 ｇ盐酸羟胺，摇匀溶解后,加钙黄指示剂少许，使颜色呈现墨绿色，在黑色背景下，立即用0.01mol·Ｌ1EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失，呈紫红色为滴定终点。同时做试剂空白试验。
－
五、结果的计算与表述
1．结果计算 测定结果按下式计算：
X（%）＝TV2×100＝TV2V0×100
V1mV1mV0式中：X为以质量分数表示的钙含量，%；
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T为EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度，g·ml-1；
V0为试样分解液的总体积，EDTA标准滴定溶液的消耗体积，ml；
V1为所取钙标准溶液的体积，ml；
V2为试样实际消耗EDTA标准滴定溶液的体积，ml；
m为试样的质量，ｇ；
2．结果表示同高锰酸钾法。 3．允许差同高锰酸钾法。
实验十 饲料中总磷量的测定
本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和单一饲料中总磷量的测定。测定范围磷含量0～20μg·ml-1。
一、测定原理
将试样中有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的[（NH4）NH4VO3·16MoO3]络合物，在波长3PO4·
包括动物难以吸收利用的植酸磷。
400nm下进行比色测定。此法测得结果为总磷量，其中
二、仪器和设备
1．实验室用样品粉碎机或研钵。 2．分析筛：40目；
3．分析天平：感量0.0001ｇ。 4．高温炉：可控制温度在550±20℃。 5．坩埚：50ml，瓷质。 6．容量瓶：50，100，1000ml。
7．刻度移液管：1.0，2.0，3.0，5.0，10.0ml。 8．凯氏烧瓶：250或500ml。 9．可调温电炉：1000ｗ。
10．分光光度计，有10mm比色皿，可在400nm下测定吸光度。
三、试剂及配制
1．盐酸溶液。1∶1水溶液（V∶V）。 2．硝酸。
37
3. 高氯酸
4．钒钼酸铵显色试剂：称取偏钒酸铵1.25ｇ，加水200ml加热溶解，冷却后再加入250ml硝酸；另称取钼酸铵25ｇ，加水400ml加热溶解，在冷却条件下将此溶液倒入上溶液，且用水定容至1000ml，避光保存。如生成沉淀则不能继续使用。
5．磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1ｈ，在干燥器中冷却后称0.2195ｇ，溶解于水中，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用蒸馏水稀释到刻度，摇匀，即成50μｇ·ｍＬ-1的磷标准溶液。
四、测定步骤
1．试样的分解
（1） 干法（不适用于含磷酸氢钙[Ca(H2PO4)2]的饲料）：称取试样2～5ｇ（精确至0.0002ｇ）于坩埚中，在电炉上低温炭化至无烟为止，再将其放入高温炉于(550±20℃)下灼烧3ｈ（或测灰分后继续进行），取出冷却，在坩埚中加入1∶1盐酸溶液10ml和浓硝酸数滴，小心煮沸约10min。将此溶液转入100ml容量瓶中，并用热蒸馏水洗涤坩埚及漏斗中滤纸，冷却至室温后，定容，摇匀，为试样分解液。
（2）湿法：称取试样0.5～5ｇ（精确至0.0002ｇ）于凯氏烧瓶中，加入硝酸30ml，小心煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入70％～72％高氯酸10ml，继续加热煮沸至溶液无色，不得蒸干（危险！）。冷却后加蒸馏水50ml，并煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，为试样分解液。
（3）盐酸溶解法（适用于微量元素预混料）：称取试样0.2～1ｇ（精确至0.0002ｇ）于100ml烧杯中，缓缓加入盐酸溶液10ml，使其全部溶解,冷却后转入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，为试样分解液。
2．标准曲线的绘制 准确移取磷标准溶液（50μｇ·ml-1）0、1.0、2.0、5.0、10.0和15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色试剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上。以0ml溶液为参比，用10mm比色皿，在400nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3．试样的测定 准确移取试样分解液1～10ml（含磷量50～750μｇ）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色试剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上。以空白为参比，用10mm比色皿，在400nm波长下，用分光光度计测定试样分解液的吸光度。在标准曲线上查得试样分解液的含磷量。
五、结果计算及表述
1．结果计算 测定结果按下式计算：
38
X(%)＝
m1V×100
mV106式中：X为以质量分数表示的磷含量，%；
m为试样的质量，g；
m1为由标准曲线查得试样分解液磷含量，μｇ；
V为试样分解液的总体积，ml；
V0为试样测定时所移取试样分解液的体积，ml。
2．结果表示 每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，所得到的结果应表示至小数点后两位。
3．允许差 含磷量在0.5％以上（含0.5％），允许相对偏差3％；含磷量在0.5％以下，允许相对偏差10％。
六、注意事项
1．比色时，待测液磷含量不宜过高，最好控制在1ml含磷0.5mg以下；
2．显色时温度不能低于15℃，否则显色缓慢；待测液在加入试液后应静置10min，再进行比色，但不能静置过久。
附：饲料中植酸磷的测定（TCA法）
一、测定原理
用30ｇ·Ｌ-1三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸盐生成植酸铁沉淀，用氢氧化钠转化为可溶性植酸钠和棕色氢氧化铁沉淀，再将可溶性植酸钠经硝酸、高氯酸混合酸消化后，用钼黄法直接测出植酸磷含量。
二、仪器和设备
1．实验室用样品粉碎机或研钵。 2．分析筛 40目；
3．分析天平 感量0.0001ｇ。 4．容量瓶 50，100ml。 5．移液管 5，10，50ml。 6．离心管 50ml。 7．卧式振荡机。 8．凯氏烧瓶：100ml。 9．具塞三角瓶：200ml。
39
10．离心机。
11．分光光度计 10mm比色皿，可在420nm下测定吸光度。
三、试剂及配制
1．三氯乙酸溶液（30ｇ·Ｌ-1） 称取3ｇ三氯乙酸（分析纯），加水溶解至100ｍL，混匀。 2．三氯化铁溶液（1ml=2mg铁） 称取三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.97ｇ，用30ｇ·Ｌ氯乙酸溶液溶解至100ml，混匀。
3．氢氧化钠溶液（1.5mol·Ｌ-1） 称取氢氧化钠（分析纯）60ｇ，加水溶解至1000ml，混匀。
4．浓硝酸（分析纯） 比重1.4，煮沸除去游离二氧化氮（NO2），使其成为无色。 5．硝酸溶液 1∶1（V∶V）；硝酸溶液1∶3（V∶V）。均用上述浓硝酸配制。 6．混合酸 硝酸∶高氯酸＝2∶1（V∶V），按比例配制。 7．显色剂
（1）100ｇ·Ｌ-1钼酸铵溶液：称取分析纯钼酸铵10ｇ，加入少量水，加热至50～60℃，使溶解冷却，再用水稀释至100ml，混匀。
（2）3ｇ·Ｌ-1偏钒酸铵溶液：称取分析纯偏钒酸铵0.3ｇ，溶于50ml水中，再加1∶3（V∶V）硝酸溶液50ml溶解，混匀。
用时将溶液⑴徐徐倒入溶液⑵中，应边加边搅拌，然后再加入已除尽二氧化氮的浓硝酸18ｍL，混匀。
8．标准磷溶液(1ml相当于100μｇ磷) 精确称取105～110℃烘干1～2ｈ的优级纯磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4349ｇ，用水溶解后移入1000ml容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀。
－1
的三
四、试样选取与制备
同饲料总磷量测定方法。
五、测定方法
1．磷标准曲线的绘制 准确吸取1ml=100μg磷的标准溶液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml于50ml容量瓶中，用水稀释至70ml左右，各加入1∶1硝酸溶液（V∶V）4ml，显色剂10ml，再用水稀释至刻度，混匀。此时系列浓度为每50ml中分别含磷的毫克数为：0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7mg，静置20min，用分光光度计在波长420nm处，用10mm比色皿，测定其吸光度。最后，以所加标准磷溶液的含磷量为横坐标，用相应的吸光度为纵坐标，绘制出磷的标准曲线。
2．试样的测定
（1）称取饲料样品3～6ｇ（含植酸磷在5～30mg范围内）于干燥的200ml具塞三角瓶中，
40
准确加入30ｇ·Ｌ
－1
三氯乙酸溶液50ml，机械振荡浸提30min，离心（或用漏斗、干滤纸、干烧
＋
杯进行过滤）。准确吸取上层清液10ml于50ml离心管中，迅速加入（1ml＝2mgFe2）三氯化铁溶液4ml，置于沸水浴加热45min，冷却后离心10min，除去上层清液，加入30ｇ·Ｌ
－1
三氯乙酸
溶液20～25ml，进行洗涤（沉淀必须搅散），水浴加热煮沸10min，冷却后离心10min，除去上层清液，如此重复2次，再用水洗涤1次，洗涤后的沉淀加入3～5ml水及1.5mol·Ｌ
－1
氢氧化钠
溶液3ml，摇匀，用水稀释至30ml左右，置沸水中煮沸30min，趁热用中速滤纸过滤，滤液用100ml容量瓶盛接，再用热水60～70ml，分数次洗涤沉淀。
（2）滤液经冷却至室温后，稀释至刻度，为试样分解液。准确移取5～10ml试样分解液（含植酸磷0.1～0.4mg）于100ml凯氏烧瓶中，加硝酸和高氯酸混合酸3ml，于电炉上低温消化至冒白烟，使余0.5ml左右溶液为止（切忌蒸干），冷却后用30ml水，分数次洗入50ml容量瓶中，加入1∶1硝酸溶液（Ｖ∶Ｖ）3ml，显色剂10ml，用水稀释至刻度，混匀，静置20min后，用分光光度计在波长420nm处测定吸光值。查对磷标准曲线，计算植酸磷的含量。
六、结果计算
测定结果按下式计算：
X（%）＝
m1V×100 6mV10式中：X为以质量分数表示的磷含量，%；
m为试样的质量，g；
m1为由标准曲线查得试样分解液磷含量，μｇ；
V为试样分解液的总体积，ml；
V0为试样测定时所移取试样分解液的体积，ml。
七、注意事项
1．试样粉碎粒度要小于40目。粒度太粗造成试样浸提不完全，使分析结果波动太大，重现性差。
2．在离心法洗涤植酸铁沉淀过程中,要注意不要损失铁沉淀物。 3．显色时的硝酸酸度要求在5％～8％（V∶V） 4．显色时温度不能低于15℃，否则显色缓慢。
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