乙二胺四乙酸的分析方法
1、对象物质
乙二胺四乙酸（EDTA） 2、目标检出下限值及定量下限值
水 质（μg/L） 目标检出下限值 EDTA
3、分析法的概要
水质试料是将试料浓缩干燥，用三氟化硼甲醇错体（BF3-MeOH）甲醇溶液甲基酯诱导体化，用GC/MS-SIM定量。另外，本方法不适用于海水。
底质试料用超音波水抽出（pH 9-12），远心分离后取水层，用蚁酸变为酸性，再分离沉降后，与水质试料相同进行操作。
关于生物试料，用均质机抽出水（pH 9-12），远心分离后取水层，用蚁酸变为酸性，再分离沉降后，与底质试料相同进行操作。 4、试药、器具及装置 （1） 试药
·乙二胺四乙酸·2Na·2H2O：市场销售特级品
·trans-1,2-环己二胺-N,N,N，,N，-四乙酸（CYDTA）·H2O：市场销售特级品 ·CYDTA溶液：CYDTA-水和物10mg溶解于1M-NaOH 100mL 调制。 ·内标准物质（菲Phenanthrene-d10、荧蒽Fluoranthene-d10）：市场销售标准品 ·内标准溶液：调制 1.0μg/mL 二氯甲烷溶液。
·三氟化硼甲醇错体甲醇溶液（BF3 abt. 14% 气象色谱用）：市场销售品 ·水：蒸馏水或矿泉水（注1）
·缓冲溶液（pH7）：调制1M-KH2PO4、加入10M- NaOH调整pH为7。 ·二氯甲烷、丙酮：残留农药试验用 ·无水硫酸钠：残留农药试验用 ·蚁酸、氢氧化钠：特级试药 （2） 器具及装置
·超音波洗净器：用于抽出底质试料 ·均质机：用于抽出鱼试料
·远心分离器：用于底质及鱼试料的抽出液的分离
0.2 目标定量下限值 0.6 底质（μg/kg） 目标检出下限值 5 生物（μg/kg） 目标检出下限值 10 ·旋转蒸发器：用于试料液的浓缩（注2）
·电吹风：根据氮气流干燥试料用。最好是能用于集中加温带罩的。 5、试料的采取·搬运
（1） 水质试料
洗剂、水、丙酮的顺序洗净，最后用蒸馏水洗5次（注3），用1L的带栓玻璃瓶采取试料水，在冷暗处（4℃以下）保存，冰冷输送。尽快进行样品的分析。 （2） 底质试料
底质采取湿重量约100g的底质，除去夹杂物后，尽量用远心分离除去水分，冷冻保存。 （3） 生物试料
鱼试料将分析部位均质化后，冷冻保存。分析时自然解冻。
另外，试料采取、搬运、调制的详细顺序按照本指导手册的[Ⅲ.关于试料的采取、搬运、调制的一般事项]进行。 6、操作试验
（1） 前处理 A、水质试料
试料100mL加入300mL的圆形烧瓶，添加CYDTA溶液50μL（注4）、用旋转蒸发器浓缩至2mL左右（注5）、转移到10mL带栓的试验管内，边加热边吹入氮气蒸发干固（注6）。 B、底质试料
试料10g加入50mL 容远沉管，添加精制水30mL、CYDTA 溶液50μL（注4）、添加数滴4M- NaOH，用抹刀充分搅动混合，超音波抽出进行10分钟后，用3000rpm远心分离10分钟。分取水层，用4M-蚁酸调整pH至2.5附近（注7），再次进行远心分离。分取水层，与水质试料相同进行处理。 C、 生物试料
试料1g加入200mL的烧杯，CYDTA 溶液50μL（注4），加入精致水30mL及数滴4M- NaOH，用均质机抽出。移至50mL远沉管远心分离。分取水层（注8），用4M-蚁酸调整pH至2.5附近，与底质试料相同进行处理（注9）。 （2） 试料液的调制
A、水质试料、底质试料及生物试料
干固试料加入BF3-MeOH溶液1mL，用栓紧紧盖住，并加固（注10），在80℃进行30分钟诱导体化反应。室温放冷后，加入内标溶液0.2mL 及缓冲液（pH7）3mL ，移到50mL分液漏斗后，每次抽出二氯甲烷溶液3mL ，抽出2次。用无水硫酸钠脱水，吹入氮气浓缩试料液至0.5mL 。 （3） 空试验液的调制
A、水质试料、底质试料及生物试料
准备与试料等量的精制水[（1）前处理]及[（2）试料液的调制]的顺序操作得到的试料液作为
空试验液。
（4） 添加回收试验液的调制
水质试料100mL，添加底质试料10g及生物试料1g的各对象物质检出下限值的5~10倍量的水溶液，充分混合后，按照[（1）前处理]及[（2）试料液的调制]顺序操作，得到的试验液作为添加回收试验液。 （5） 标准液的调制
调制 EDTA·2Na·2H2O 的100mL水溶液。 （6） 测定 A、GC/MS测定条件 a、气象色谱部
·柱：溶融石英毛细管柱（25m*0.32mm 0.52μm firm thickness） ·液相：5% 苯甲基硅？（フェニルメチルシリコン）（PMQ） ·柱温度：70℃（2分）→15℃/分→300℃（10分） ·注入口温度：250℃
·注入法：不分流法（2分后清除、注入2μL） ·キャリアーガス：He 柱压：7.5psi ·接口温度：250℃ b、质量分析部
·离子化法：EI Positive ·离子化能源：70eV ·离子源温度：250℃ ·离子化电流：300μA ·检出模式：SIM c、 测定离子
对象物质，CYDTA及内标准物质的测定离子见表1（注11）。 B、 校准曲线
标准液（10μg/mL水溶液）在0~500μL的范围阶段性采集（注12）、加入CYDTA 溶液50μL（注4），边加热边吹入氮气蒸发干固。以下按[试料液的调制]项操作得到的试料液注入GC/MS，根据标准物质和内标准的峰面积比做成校准曲线。
表1 对象物质、代替物质及内标准物质的测定离子
定量用 EDTA 174 测定离子 确认用 289 348 CYDTA （EDTA-d12） 菲Phenanthrene-d10 荧蒽Fluoranthene-d10 C、试料液的测定
402 360 188 212 校准曲线做成后，注入空试验液、测定用试验液及添加回收试验液进行测定。每到一定时间注入校准曲线用的中间浓度的试料液，确认在期待值的20%以内变动。如果超过20%，调整GC/MS后，做成并修正校准曲线再测定。 7、同定、定量及计算 （1） 同定
对象物质的定量离子及确认离子的峰值出现在预想保持时间±5秒以内，确认离子和定量离子的峰值强度比在预想值±20%以内，确认为物质存在。 （2） 定量及计算
得到的对象物质和内标准（注13）的峰面积比，及校准曲线得出检出量。根据检出量、分析的试料量等，按下列公式计算试料中的浓度（注14）。另外，底质的试料量是干燥试料量。
水质试料浓度（μg/L）=检出量（μg）× 1 ×换算系数
试料量（L）
底质·生物试料浓度（μg/kg）=检出量（μg）× 1 ×换算系数 试料量（kg）
自由体的换算系数= EDTA（292.3） = 0.785 EDTA·2Na·2H2O（372.2）
（在这里校准曲线是试料液中存在的对象物质的全量） 8、分析精度管理
按照本调查手册的[Ⅱ.分析精度管理] ，设定标准作业顺序，进行器具·装置的性能评价和维护管理，必须记录结果（注15）。 9、注意事项
本法是不使用替代品为前提记载的。替代品物质的EDTA- d12是市场销售的能使用。
替代品物质是钠盐的情况下溶解于水，但是游离体不易溶于水的情况下，用1M- NaOH 水溶液溶解调制。
（注1） 关于使用水根据本分析法进行定量，检讨是否可以使用。
（注2） 旋转蒸发器一定设置防止逆流。另外，前使用者使用有机溶媒浓缩，溶媒滞留有机溶媒
进入的情况下有蒸汽压，水浓缩困难。一定除去残留的有机溶媒再使用。
（注3） 试验室使用的洗剂有EDTA配合的物质，洗净后充分用蒸馏水冲洗。事前干固0.1mL 的
洗剂，用本法进行诱导体化确认是否添加了EDTA。
（注4） 使用替代品（EDTA- d12）的情况下最好不添加。此种情况下，定量将替代品作为内标
准。不使用替代品的情况下，CYDTA分析能很好的进行判断。
（注5） 旋转蒸发器的热水温度不需要控制。尽可能提高浓缩速度。但避免突沸程度的温度。检
体数多花费时间较长时，将试料水倒入200mL烧杯在热板上浓缩也可以。（根据热板温度，大约需要2.5小时进行浓缩），注意加热到无水状态后避免烧焦。另外，本法不适用于海水。因为盐大量析出所以分析困难。
（注6） 充分进行干固。残留水分进行诱导体化反应不完全。另外，持续吹入氮气不必担心EDTA
（注7）（注8）（注9）（注10）（注11）（注12）（注13）（注14）（注15）挥发。检体数多的情况下，浓缩试料水装入10mL容KD浓缩管，130℃ 放置在恒温干燥器内放置3小时干燥。即使放置1夜也不会出现回收率低下。
碱性远心分离有可能出现水层稍微混浊的情况。酸性再次分离后会变为透明。 移动时，避免晃动。避免装入沉淀物。
生物试料干固时，用电吹风加热边加热至残留物为褐色。干固不充分的情况下，诱导体
化反应进行不完全。另外，抽出二氯甲烷时水层难分离。
因为有压力所以栓要盖紧，并加固。
的定量使用峰强度的大值m/z174，如果有妨碍也可使用其它m/z289或348。CYDTA
能作为内标准的定量，但是添加回收试验的结果回收率结果超过100%的情况下以荧蒽Fluoranthene-d10 作为内标准定量。另外，生物试料荧蒽Fluoranthene-d10（m/z 212）妨碍峰值的情况下，用菲Phenanthrene-d10（m/z188）定量。
校准曲线的浓度范围根据使用的GC/MS的感度进行适当变更也可以。 使用替代品的情况下对象物质和替代品的峰面积比做出校准曲线进行定量。
EDTA的标准液使用EDTA·2Na·2H2O，需换算为游离体的无水物浓度乘以换算系数。本法底质的回收率较差为60%左右。使用替代品的情况下没有问题。
EDTA
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