唾液中酸性富含脯氨酸蛋白遗传多态性的进一步研究 The Further Study of Genetic Polymorphisms o

遗传ＨＥＲＥＤＩＴＡＳ　（Ｂｅｉｊｉｎｇ）　１７（５）：　１４－１６　１９９５睡液中酸性富含脯氨酸蛋白遗传多态性的进一步研究庞濒贾静涛胡忠国李庆生（中国医科大学法医系血清学教研室，沈阳１１０００１）摘要本文用聚丙烯酞胺凝胶等电聚焦技术，调查了中国辽宁地区２７４名个体酸性富含脯氨酸蛋白二位点上共６种等位基因频率的分布．ＰＲＨＩ　＊　１＝０．０５１１，　ＰＲＨＩ　＊　２＝０．１７１５，　ＰＲＨＩ　＊　４＝０．７６１０，ＰＲＨＩ＊６＝０．０１６４；　ＰＲＨ２＊１＝　０．８１５７，　ＰＲＨ２＊２＝０．１８４３，　Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ定律进行吻合度检验，理论值与期望值高度一致．本研究还就我们调查的数据与Ｍａｅｄａ等提出的新的遗传学说进行检验吻合，证明了这一理论适用于中国汉族群体，同时提供了一组新的、不同于作者先前用旧命名法报道的遗传学数据．本次研究还同时检出了另两种酸性富含脯氨酸蛋白Ａｕ和Ａｖ，其中Ａｕ（＋）出现率为２．５５％；　Ａ　ｖ（＋）为０．３６．关链词酸性富含脯氨酸蛋白，多态性，ＰＡＧＩＥＦ，基因频率Ｔｈｅ　Ｆｕｒｔｈｅｒ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｏｆ　Ｓａｌｉｖａｒｙ　ＡｃｉｄｉｃＰｒｏｌｉｎｅ－ｒｉｃｈ　ＰｒｏｔｅｉｎｓＰａｎｇ　Ｈａｏ　Ｊｉａ　Ｊｉｎｇｔａｏ　Ｈｕ　Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｌｔ　Ｑｉｎｇｓｈｃｎｇ（Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００１）人唾液富含脯氨酸蛋白（Ｐｒｏｌｉｎｅ－ｒｉｃｈ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，　ＰＲＰｓ）约占唾液中蛋白质的三分之二，并且显示出众多的遗传多态性〔２）．这些多态物质的产生是由６个基因位点构成的一个大的人类唾液富含脯氨酸蛋白多基因家族所决定③．１９８５年，Ｍａｅｄａ等进一步将这一大家族分成二个小家族，其一：ＰＲＨＩ和ＰＲＨ２二位点上产生的酸性富含脯氨酸蛋白（（ＡＰＲＰｓ）；其二：ＰＲＢ　１－ＰＲＢ２四位点上产生的碱性和糖基化富含脯氨酸蛋白（４）．自从１９７３年Ａｚｅｎ等发现了第一个酸性富含脯氨酸蛋白的富含脯氨酸蛋白（Ｐｒｏｌｉｎｅ－ｒｉｃｈ，　Ｐｒ）系统多态性以来〔５），又发现了多种酸性富含脯氨酸蛋白多态系统：Ｄｂ（１９７４，　Ａｚｅｎ），　Ｐａ（１９７５，　Ｆｒｉｅｄｍａｎ），　ＰＩＦ（１９８１，　Ａｚｃｎ），　Ａｓ（１９８６，　Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ）及Ａｔ，　Ａｕ，　Ａｖ（１９８８，　Ｓｈｉｎｔａｎｉ）．作者曾经对中国人群中Ｐｒ，　Ｄｂ，　Ｐａ和ＰＩＦ等４种酸性富含脯氨酸蛋白的多态性分布情况用辽宁地区样本进行了调查报道（’）．本文利用腮腺液样本，采用超薄层等电聚焦技术，对包括作者先前检出的４种在内的共７种酸性富含脯氨酸多态蛋白在中国（辽宁地区）汉族人群中的分布情况进行了研究，同时对ＰＲＨＩ位点上的酸性富含脯氨酸蛋白基因按新遗传学说进行了阐述．Ｉ材料和方法１．１样本的采集将双室杯的内室贴住一侧腮腺导管开口处，口含维生素Ｃ丸刺激腺体分泌，即可得到清澈的水状腮腺液．约取０．５ｍｌ，分装，放于一３０℃冰箱备用．１．２聚丙烯酞胺凝胶板制作１．２．１制胶制备１００　ｘ７０ｘ０．２ｍｍ胶板，所灌制凝胶总液量为１．５ｍ１．聚丙烯酞胺浓度（Ｔ）为７．０％，交联度（Ｃ）为３．０％，尿素浓度为３０％，　Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ浓度为４．０，其中ｐＨ３．　５－５．０和ｐＨ４．０－６．５　＝　１：　１（Ｖ　／　Ｖ），加过硫酸钱后，室温下聚合，放冰室中保存备用．５期１．２．２聚焦庞濒等：唾液中酸性富含脯氨酸蛋白遗传多型性的进一步研究巧使用２２１９ＭｕｌｔｉｔｅｍｐＨ冷却循环器；２２９７－Ｍａｃｒｏｄｒｉｖｅ　５恒功率电栋（ＬＫＢ）；　２２１７Ｍｕｌｔｉｐｈｏｒｌｌ电泳槽（ＬＫＢ）．阳极条浸以０．５ｍｏｌ　／　Ｌ　Ｈ３ＰＯ４，阴极条浸以０．　５ｍｏｌ　／　Ｌ　ＮａＯＨ．首先将凝胶板进行预聚焦，电压为１　８００Ｖ，电流ｌＯｍＡ．功率２Ｗ，循环水温４１Ｃ．　３０－　６０分钟后用３ｘ６ｍｍ滤纸条浸取腮腺液样本，直接将其加在距阴极端ｌ　ｃｍ的胶面上，０．５－１小时后提高功率至４Ｗ，恒电压后，继续电泳２０－３０分钟，共约３．５小时．１．２．３谱带显现应用２０％的三氯乙酸直接固定聚焦后的凝胶，１０分钟后可看到清晰的谱带，照相保存．２结果和讨论２．１酸性富含脯氨酸蛋白新旧遗传学说比较以往研究认为位于第１２号染色体的短臂上的Ｄｂ，　Ｐａ．　ＰＩＦ等基因位点，是由３个不同但却密切连锁的基因（Ｐａ－＇，　Ｄｂ＋．　ＰＩＦ＋）密码形成，并且每个基因是以一个有产物的等位基因和一个无产物的无效基因来表达．这就决定了它们的遗传方式是Ｄｂ，　Ｐａ，　ＰＩＦ皆以显性和隐性来表达其表型．然而，近年来Ｍ　ａｅｄａ等检验了众多学者调查的酸性富含脯氨酸蛋白群体和家系研究数据，提出了一种新的基因及基因位点命名法（幻，阐述并证明了一种新的遗传理论：即Ｄｂ（＋），　Ｐａｌ［Ｐａ（＋）］，　Ｐａｔ，　ＰＩＦ（＋）蛋白是分别由４个共显性等位基因ＰＲＨ１　＊　１，　ＰＲＨ１　＊　２，ＰＲＨ１　＊　３，　ＰＲＨＩ　＊　４在叫做ＰＲＨ１单一位点上的产物，这个位点不存在无效基因。本研究就我们调查的数据与这一新的遗传学说进行检验吻合，得出：（”在所调查的２７４名中国辽宁地区汉族个体中无一个体同时存在Ｄｂ（＋），Ｐａ（＋），　ＰＩＦ（＋）．也无一个体同时表现为Ｄｂ卜），　Ｐａ卜）和ＰＩＦ卜）．（２）Ｄｂ，　Ｐａ，　ＰＩＦ的基因频率总和约为０．９３（理论值实际上应为１，但这里未包括Ａｔ＋和只能用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法才能检出的Ａｓ＋等基因的频率）（９）　．　（３）应用２０个家系进行研究，无一例外地表现为单一位点型．充分证明了这一理论适用于中国汉族群休，同时提供了一组新的，不同于作者先前用旧命名法报道的遗传学数据．２．２表现型判定及谱带ＰＲＨ　１（包括原来的Ｄｂ，　Ｐａ，　ＰＩＦ　３个多态系统）和ＰＲＨ２（Ｐｒ系统）两多态系统的表现型判定同作者先前报道．Ａｔ，　Ａｕ和Ａｖ是３个新近检出的酸性富含脯氨酸蛋白，前二者在等电聚焦电泳上皆由单一带组成．其中Ａｔ（＋）带位于Ｐａ与Ｐｒ２二带之间；Ａｕ（＋）带位于ＰＩＥＳ与Ｐｒ２之间；Ａｖ（＋）带则由一条位于Ｄｂ．Ｆ和Ｐｒ３二带之间的快带和一条位于Ｄｂ．Ｓ和Ｐｒｌ二带之间的慢带构成．分型标准模式图及各种酸性富含脯氨酸蛋白电泳谱型见图１．图．酸性富含脯氨酸蛋白电泳谱型及模式图２，３中国（辽宁地区）汉族人群酸性富含脯氨酸蛋白多态的分布及与其它群体比较本文共调查了辽宁地区汉族人２７４例腮腺液样本，其结果如表１所示．Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ吻合度检验结果，实测值与期望值高度一致．将本文结果与其他人群唾液酸性富含脯氨酸蛋白多态的分布比较见表２（ＰＲＨ２位点同先前报道）．统计学检验结果，ＰＲＨ１　＊　１和ＰＲＨ１＊２两基因频率的分布在中国（辽宁地区）与以上各群体之间比较差１６遗传ＨＥＲＥＤＩＴＡＳ　（Ｂｅｉｊｉｎｇ）　１９９５　１７卷别不显著（（Ｐ　＞　０．０５）；　ＰＲＨ　１　＊　４仅有中国（辽宁地区）人群与马来人之间分布具有显著差异（（Ｐ＜０．０１）；本次研究新检出的ＰＲＨＩ　＊　６基因产物Ａｔ蛋白，在印度人群中未检出，在黑人及其他白人中也未见检出的报道，提示Ａｔ可能为蒙古人种的标志．表１中国（辽宁地区）汉族人唾液ＡＰＲＰｓ型系统的分布系统和表现型观察值期望值ｚ２　基因频率例数！％例数％ＰＲＨＩ１一１Ｉ　０．４　０．７　０．３　０．１３｝ＰＸＨ　１，１　＝０．０５１１　１－２　４　Ｌｓ　４．８　１．８　０．１３ＰＲＨ　Ｉ＊２＝０．１７１５　１－４　２２　８．０　２１．３７．８　０．０２尸双Ｈｉ＊４　＝　０．７６１０１－６　０　０　０．５　０．２　０．５０ＰＸＨ　Ｉ＊６　＝　０．０１６４　２－２　１２　４．４　８．１　３．０　１．８８（ｄｊ＝　９）　２－４　６６　２４．１　７１．５２６．１０．４２２－６　０　０　１．５　０．５　１．５０４－月１６０　５８．４　１５８．７　５７．９０．０１４－６　９　３．１　６．８　２．５　０．７１６－６　｝。０　０．１　０．０　０．１０合计１　２７４　９９．９　２７４．０　１００．１　５．４１ＰＲＨ２１一Ｉ１８５　６７．５　１８２．３　６６．５０．０４ＰＲＨ　２＊１　＝０．８１５７　２－１　７７　２８．１８２．４３０．１０．３５尸ＲＨ２＊２＝０．１８４３　２－２　１２　４．４　９．３　３．４　０．７８（ｄ介２）　合计２７４　１００．０　２７４．０　１００．０　１．１７表２不同人群ＰＲＨＩ位点等位基因频率比较群体例数基因ＰＲＨ　１＊１尸ＲＨ１＊２尸ＲＨＩ＊４尸ＲＨＩ＊６中国（辽宁）２７４　０．０５１１　０．１７１５　０．７６１０　０．０１６４　新加坡２１５　０．０６８　０．２１６　０．７００　０．０１２　马来西亚２２０　０．０８２　０．２３９　０．６５０　０．００４　印度１０６　０．１０４　０．１６５　０．７３１　０．００８　日本５７８　０．０３５　０．１９３　０．７５１　２．４酸性富含脯氨酸蛋白中Ａｕ，　Ａｖ的遗传多态性现代生化遗传学的研究已经证明，Ａｕ，　Ａｖ蛋白皆归属于酸性富含脯胺酸蛋白，并且与父母有明显的遗传关系．但属于ＰＲＨ１还是ＰＲＨ２位点上的产物，还有待于进一步研究证实．在本研究调查的２７４名个休中，Ａｕ（＋）出现率为２．５５％，　Ａｖ（＋）仅检出一例，占０．３６％．应在亲权鉴定引起重视．非常有趣的是，检出Ａｖ（＋）的个体同时存在较少见的Ａｕ，这一现象无疑对分析Ａｕ，　Ａｖ两蛋白的遗传基因归属是有意义的．参考文献〔１）庞ＡＭ，　１０）９０．法ｉＫ学杂志，６（４）：　１－－４．〔２〕１ｌｅｎｎｉｃｋ　Ａ，　１９８２Ｍｏｌｅ．　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４５：８３－９９．〔３）Ｈａｙ　Ｄ　１，　ｅｉ　ａｌ，　１９８８．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｊ．，２５５（１）：１５一２１．〔４〕Ｍａｅｄａ　Ｎ，１９８５．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｇｅｎｅｔ．，　２３：４５５－４６４．〔５〕Ａ２ｅｎ　Ｅ　Ａ，　ｅｔ　ａｌ，　１９７３．　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　１８０：　１０６７一１０６９．（６）Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ，　１９９０．　Ｈｕｍ．Ｈｅｒｅｄ．，　４０：　２２１一２３０．〔７〕ＳｈｉｎｔａｎｉＭ，ｅｔ　ａｌ，．９９０．　Ｈｕｍ，Ｈｅｒｅｄ＿　４０：　８９－９８．（ａ〕Ｍａｅｄａ　Ｎ，　ｅｔ　ａｌ，　１９８５．　Ｊ．Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ，２６０：１１１２３一１１１３０．〔９）Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ，　１９８６）．Ｄｅｎｔ　Ｒｅｓ．，６５：　３２６．（１０）　Ｓｈｉｎｔａｎｉ　Ｍ。ｅｔ　ａｌ，　１９９０．　Ｂｉａｃｈｅｍ．　Ｇｅｎｅｔ．，　２８价／４）：　１７３一１８４．本ｚＣ黔１９９３年１１月１２日收到．