头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

维普资讯 http://www.cqvip.com 第３１卷　９０２　２（Ｘ／７年第１２期　黑龙江医学　Ｖ０１．３１，Ｎｏ．１２　Ｄｅｃ．２０（ｙ７　ＨＥＩ　ＯＮＧ　ＪＬ　Ｇ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＪＯＵＲＮＡＬ　头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐　甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价　刘小朵　（江苏省通州市人民医院检验科，江苏通州２２６３００）　摘要：目的　评价头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（艘ＳＡ）的方　法。方法　采用头孢西丁纸片法（３０　片）和苯唑西林纸片法（１．０　片）检测ＭＲＳＡ，以胶乳凝集试验检　测ＰＢＰ２ａ为参考方法。结果　用胶乳凝集实验检测的１０６株金黄色葡萄球菌，其中ＰＢＰ２ａ阳性为８７株，阴　性为１９株，用头孢西丁纸片法筛查ＭＲＳＡ敏感性为９８．９％，特异性为１００％。苯唑西林纸片检测ＭＲＳＡ敏　感性为９５．４％，特异性为９４．７％。结论头孢西丁纸片法筛查ＭＲＳＡ与ＰＢＰ２ａ的检测具有较好的一致性，　该法可在常规工作中推广使用。　关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）；头孢西丁纸片法；胶乳凝集；苯唑西林纸片法　学科分类代码：３２０．１１６０　中图分类号：Ｒ４４５．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—５７７５（２００７）１２—０９０２—０２　Ｔｏ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎｄ　Ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ　Ｒｅｐｌａｃｅｓ　Ｏｘａｃｍ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（ＭＲＳＡ）　ＵＵ　Ｘｉａｏ—ｄｕｏ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｔｏｎｇｚｈｏｕ　Ｃｉｔｙ，Ｔｏｎｇｚｈｏｕ　２２６３００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭｅｔｈｉｃｉＵｉｎ—Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｍｒ，ＳＡ）．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｄｉｓｋｓ　ｗｉｈ　ｔ３０　ｃｍ　ａ】彻∞ｅ　ｏｆ　ｃｅｆｏ￣ｄｎ　ａｎｄ　１　ｍｉｃｒｑ　陷埘　ｎｅ　ｏｆ　ｏｘａｅｉｌｌｉｎ　Ｗｅ．／￣ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｃｔｅｉｏｎ　ｏｆ　Ｍ田：Ｓ　ｗｉｈ　ｌａｔｔｅｘ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔｓ　ａｓ　ｈｅ　ｔｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｏｆｔｈｅ　１０６　ｔｓｔｅ　ｉｓｏｌａｔｓ　ｏｆＳｔｅａｐｈｙｌｏｅｃｕｓ。８７　ｉｓｏｌａｔｓ　ｅｓｈｏｗｅｄ　ＰＩ；Ｐ２ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｙ　ｌａｔｅｘ　ｉｆｘａｔｉｏｎ　ｔｓｔｅｓ，１９　ｉｓｏｌａｔｓ　ｗｅｒｅｅ　ＰＢＰ２ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｉｎ　ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｓｔｅｓ，ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ　ｗａｓ　９８．９％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｉｃｉｆｔｙ　Ｗａｓ　１００％．Ｉｎ　ｏｘａｃｉｌｌｉｎ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｓｔｅｓ．ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　９５．４％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｉｃｉｔｆｙ　ｗａｓ　９４．７％．Ｃｏｌｌｄｌｌｓｉｏｎ　Ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ　ＭＲＳＡ．ｔｈｅ　ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｅｓｔ　Ｗａｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｈ　ｔｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｌａｔｅｘ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｆｏｒ　ＰＢＰ２ａ．　１ｅ　ｃｅ．　ｆｏｘｉｔｉｎ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｉＳ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｂｅ　ｐｅｆｆｏｍ￣ａｎｄ　ｃ锄ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｗｏｒｋｓ．　Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：ＭＲｓＡ：Ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｓｔｅｓ；ｌａｔｅｘ　ｉｆｘａｔｉｏｎ；Ｏｘａｃｉｌｌｉｎ　ｉｓｋ　ｄｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｔｓｔｅｓ　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院感染的重　要病原菌，其引起的感染和病死率呈逐年增加的趋　势。目前临床上常规用于筛查的主要方法是苯唑　西林纸片法。然而苯唑西林纸片法对一些异质性　的ＭＲＳＡ、低水平ＭＲＳＡ和临界耐药的金葡菌检测　的敏感性不够好【卜２１。２００４年，美国临床实验室标　准化委员会（ＮＣＣＬＳ）推荐用头孢西丁纸片法检测　ＭＲＳＡ［３Ｉ。由于ＭＲＳＡ上存在ＭｅｃＡ基因，其编码的　青霉素结合蛋白（ＰＢＰ２ａ）在ＭＲＳＡ耐药性的产生中　已得到确认【４Ｊ。因此，应用胶乳凝集试验检测ＭＲ—　参考文献：　ｓＡ是一种较为准确的方法。本实验用两种纸片扩　散法筛查临床分离的１０６株葡萄球菌，并以胶乳凝　集试验为参考方法，对这两种纸片法进行比较。　１材料与方法　１．１菌株来源　收集２００６—０９—０１—２Ｏ０７—０８—３１本院微生　物实验室自临床住院及门诊各种感染样本中分离　保存的金黄色葡萄球菌１０６株，标准菌株为金黄色　葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３。　２３：３９３—３９５．　［１］王云钊，曹来宾．骨放射诊断学（Ｍ］．北京：　北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社，　１９９５：２４０—２４４．　［２］上海第一医学院“ｘ线诊断学”编写组．ｘ　线诊断学（第二册）［Ｍ］．上海：上海科学技术出版　社，１９ｒ７８：５３８—５４０．　［４１孙保国，康文成，陈风苞．９２例骨巨细胞瘤　初步分析［ＪＪ．中华骨科杂志，１９９５，１５：５１　５２．　［５］杨星，马彪，潘新之．螺旋ＣＴ表面遮盖法　及多平面重组对骨病变的诊断价值［Ｊ］．临床放射　学，１９９９，１８：１０３．　（编辑：薛凡）　（收稿日期．＇２００７—１０—１９）　［３］Ｄａｆｆｎｅｒ　Ｒ　Ｈ，Ｎａｔｈａｎ　Ｇ，Ｂｕｔｅｒｂａｕｇｈ　Ｇ　Ａ．Ｃａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔ　８５０　Ｇｉａｎｔ　ｃｅｌｌ　ｔｕｍｏｒ［ＪＪ．Ｓｋｅｌｅｔａｌ　Ｒａｄｉｏｌ，１９９４，　维普资讯 http://www.cqvip.com

第３１卷　２ＯＯ７年第ｌ２期　黑龙江医学　Ｖｏ１．３１。Ｎｏ．１２　ＨＥＩ　ＬＩ　Ｇ　ＪＬ　Ｇ　ＭＥＤＩＣ　ＪＯＵＲＮＡＬ　Ｄｅｅ．２００ｒ７　９０３　１．２药物纸片与检测试剂盒　头孢西丁纸片（３０　片）、苯唑西林纸片（１．０　片）、水解酪蛋白（Ｍ—Ｈ）琼脂为杭州天和生物　有限公司产品；胶乳凝集试剂盒购自上海季丰科技　有限公司，其中试剂组成为：Ｒ１（致敏的胶乳颗粒）、　Ｒ２（阴性对照的胶乳颗粒）、Ｒ３（提取液１）、ａ４（提取　液２）。　１．３细菌鉴定　所有菌株均以常规方法培养分离，革兰氏染　３讨论　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）是临床院　感的常见致病菌，目前用ＰＣＲ方法检测ＭｅｃＡ基因　为检测ＭＲＳＡ的金标准【３】。但是该方法对于实验　室设备、操作人员的要求十分高，而且费用昂贵，不　易在临床实验室中常规开展。检测ｍｅｃＡ基因编码　产物ＰＢＰ２ａ的表达将是判断金黄色葡萄球菌对甲　氧西林是否耐药的最直接证据（４３。胶乳凝集是一　种简便、快速、准确的方法【５］。其基本原理是：　色、血浆凝固酶试验并结合ＰＣ复合板鉴定到种。　１．４药敏试验方法　按标准Ｋ—Ｂ（Ｋｉｒｂｙ—Ｂａｕｅｒ）法进行。头孢西丁　纸片法，挑取单个菌落，调整菌悬液的浊度为０．５　麦氏单位，均匀涂布于含２％ＮａＣＬ（　厂ｖ）的Ｍ—Ｈ　琼脂平板上。贴上头孢西丁纸片，在３５　ｃ【＝培养２４　ｈ。根据２０Ｏ４年ＮＣＣＬＳ判定标准：ＭＲＳＡ抑菌环直　径≤１９／ｎｒｎ，ＭＳＳ￣／抑菌环直径Ｉ＞２０　ｍｍ（２４　ｈ观察结　果）。苯唑西林纸片法，操作同上。根据２００４年　ＮＣＣＬＳ判定标准：ＭＲＳＡ抑菌环直径≤１０　ｍｉｌｌ，ＭＳＳＡ　抑菌环直径≥１３　ｍｍ（２４　ｈ观察结果）。　１．５　ＰＢＰ２ａ检测　根据试剂盒说明书。ＰＢＰ２ａ的提取：在无菌的　离心管中滴加４滴Ｒ３，用１．５　的接种环挑取２环　葡萄球菌，与　充分混匀，在沸腾的水中或９５％　１００ｃ【＝的水中加热３　ｒｎｉｎ左右（不要超过５　ｒｎｉ￣），冷却　至室温后加２滴　混匀，１　５００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｒｎｉｎ，使　用悬浮液为凝集过程的标本。胶乳凝集过程：在测　试卡的２个圆环上分别加１滴Ｒ。和Ｒ２，加上述悬　液标本５Ｏ　，混匀３　ｍｉｎ，观察若发现凝集为阳性，　不凝集为阴性。　２结果　２．１　ＰＢＰ２ａ检测结果　１０６株金黄色葡萄球菌中ＰＢＰ２ａ阳性８７株，阴　性１９株。　２．２两种纸片扩散法检测ＭＲＳＡ结果　用头孢西丁和苯唑西林纸片法筛选ＭＲＳＡ的　结果见表１、２。从表１中可见：苯唑西林纸片扩散　法筛选ＭＲＳＡ的敏感性为９５．４％，特异性为　９４．７％；从表２中可见：用头孢西丁纸片扩散法筛选　ＭＲＳＡ敏感性为９８．９％，特异性为１００％。　表１苯唑西林纸片法筛选ＭＲＳＡ的结果（株）　表２头孢西丁纸片法筛选ＭＲＳＡ的结果（株）　ＰＢＰ２ａ单克隆抗体致敏的胶乳颗粒与ＭＲＳ的膜蛋　白提取物作用，产生肉眼可见的凝集颗粒。诱导后　的ＰＢＰ２ａ可以提高检出率，因此在ＭＨ琼脂中加入　ＮａＣ１，挑取苯唑西林周围的菌落。因为ＮａＣ１和苯唑　西林可以增强ＭｅｃＡ基因的表达促进ＰＢＰ２ａ的产　生，从而提高灵敏度，这对ＰＢＰ２ａ的检测很重要。　实验中发现，在Ｍ—Ｈ琼脂平板上，苯唑西林　的抑菌环周界相对模糊，这就为准确测量造成一定　的困难，而头孢西丁相对较清晰。　实验表明：两种纸片扩散法中，用头孢西丁纸　片法检测ＭＲＳＡ与胶乳凝集试验有很好的一致性，　其敏感性为９８．９％，特异性达１００％，与之相比，目　前临床上广泛使用的苯唑西林纸片法敏感性和特　异陛都不如头孢西丁。因此，头孢西丁纸片检测　ＭＲＳＡ优于苯唑西林纸片。　参考文献：　【１　Ｊ　Ｆｅｌｔｅｎ　Ａ，ＧＩ彻ｄｒｙ　Ｂ，Ｉ￣ｓｎａｎｇｅ　Ｐ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｏｗ—　ｌｅｖｅｌ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ（ＭＲ－　ＳＡ）：ａ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ’ｖｉｔｈ　ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ　ａｎｄ　ｍｏｘａｌａｃ．　ｔａｍ，ｔｈｅ　Ｖｉｔｅｋ　２　ｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＭＲＳＡ—ｓｃｒｅｅｎ　ｌａｔｅｘ　ａｇｇｌｕｔｉｎａｉｔｏｎ　ｔｅｓｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，２００２，４ｏ（８）：２　７６６　—２　７７１．　［２）Ｓａｋｏｕｌａｓ　Ｇ，Ｇｏｌｄ　Ｈ　Ｓ．Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ：ｃｏｍｐｒｉｓｏｎ　ｆｏ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ￣ｓｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍｅｃＡ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ｓｔｒａｉｎｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，２００１，３９　（１１）：３　９４６—３　９５１．　［３］Ｐｒｅｄａｒｉ　Ｓ　ｃ，Ｌｉｇｏｚｚｉ　Ｍ　ｎａｄ　Ｆｏｎｔａｎａ　Ｒ．Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈｉｃｉＨｉｎ－－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ－－ｎｅｇａ・－　ｔｉｖｅ　ｓａｔｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎ．　ｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９１，３５（１２）：２　５６８—２　５７３．　［４］Ｈｉｒａｍａｔｓｕ　Ｋ，Ｃｕｉ　Ｌ，Ｋｕｒｏｄａ　Ｍ．Ｔｈｅ　ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ　ｎａｄ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｎ．－　ｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，９（１０）：４８６　２９３．　［５］Ｌｏｕｉｅ　Ｌ，Ｃｈｏｉ　Ｅ．Ｅｖａｌｕａｉｔｏｎ　ｆｏ　ｔｈｒｅｅ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｈｔ．　ｄｏｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，２０００，３８：２　７１０　２　７１３．　（编辑：谢忠艳）　（收稿日期：２００７—１０—１５）