C14H22N6O5·HCl 390.82
L-缬氨酸， 9-[[2-羟基-1-（羟甲基）乙氧基]甲基]鸟嘌呤酯，盐酸盐
L-缬氨酸，2-[（2-氨基-1,6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-yl）甲氧基]-3-羟丙基酯，盐酸盐 [175868-59-5]
按干燥品计算，本品含C14H22N6O5·HCl应为97.0%~102.0%。
包装与贮存——密封包装，25℃保存，允许温度浮动范围15℃~30℃。
鉴别
A：红外吸收（197K） B：紫外吸收（197U） 溶液：10μg/ml 溶剂：甲醇
C：本品的水溶液（1→20）显氯化物的鉴别反应。（191）
水分，方法一（921）：取本品100mg，依法检查，含水分不得过8.0%。
炽灼残渣（281）：取本品1g，依法检查，遗留残渣不得过0.10%。
重金属，方法一（231）：不得过0.002%。
异丙醇
内标溶液——取100μL的1,4-二氧六环到100mL容量瓶，用二甲基甲酰胺定容。
标准储备液——分别取1.0mL异丙醇与0.1mL甲苯到同一100mL容量瓶，用二甲基甲酰胺定容。（注：甲苯用来调整系统适用性）
标准溶液——取2.0mL内标溶液置于反应瓶中，再加入100μL标准储备液，混匀，待用。
系统适用性溶液——使用标准溶液
供试品溶液——精密称取90~100mg的盐酸缬更昔洛韦，置于反应瓶中，精密量取2.0mL的内标溶液加入其中，混匀待用。 色谱系统（见色谱法（621））——配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪，色谱柱为涂布3.0-µm G43固定相的0.53mm× 30m毛细管柱，载气为氦气，流速为10.5mL/min，分流比为1:15。色谱程序设定如下：初始柱温为40℃，保持10min，后在25℃/min下逐渐升温至240℃。（注：每次进样后调节柱温至240℃，并保持15min左右）进样口温度保持在250℃，检测器温度保持在300℃。系统
适用性溶液进样后，对照图谱，1,4-二氧六环与甲苯的分离度不得小于8，理论塔板数按1,4-二氧六环峰计算不得小于6000，重复进样时，异丙醇与1,4-二氧六环的面积比的RSD不得过15%。
操作——分别进样等量体积（0.5μL）的标准溶液与供试品溶液，记录色谱图，计算峰面积。按下式计算盐酸缬更昔洛韦中异丙醇的百分含量。
100(VC /W)(RU / RS)
其中，V为供试品溶液体积（mL）；C为标准溶液中异丙醇浓度（mg/mL）；W为盐酸缬更昔洛韦重量（mg）；RU 与RS 分别为供试品溶液与标准溶液中异丙醇的峰面积比。含异丙醇不得过1.0%。
有关物质 测试1
溶液A——0.10M磷酸二氢铵溶液，按含量测定项下要求制备。 溶液B——甲醇
流动相——使用溶液A与溶液B进行线性洗脱，见表一，可适当调整。（见色谱法项下系统适用性（621））
系统适用性溶液——按含量测定项下要求配制。 供试品溶液——使用含量测定项下的供试品溶液。 色谱系统（见色谱法（621））——使用液相色谱仪，检测波长254nm，色谱柱为涂布L1固定相的4.6mm×15cm色谱柱，色谱程序见表一。
表一 时间（min） 溶液A（%） 溶液B（%） 洗脱法 等度 0-5 92 8 92→80 8→20 梯度 5-15 80→30 20→70 梯度 15-30
（注：进样间隔需用流动相平衡至少15min）
柱温为25℃，流速为1.0mL/min。用系统适用性溶液进样，记录色谱图，缬更昔洛韦的第一个峰与甲氧基甲基鸟嘌呤峰的分离度不得小于1.0，缬更昔洛韦的两个峰（R与S的 L-缬氨酸酯）不得小于3.0；理论塔板数按缬更昔洛韦第二个峰计算不得低于8000；缬更昔洛韦第二个峰的拖尾因子不得过1.4。（注：通常缬更昔洛韦第二个峰的保留时间为5~8.5min。）
操作——取20μL供试品溶液进样，记录色谱图，计算相关峰面积。各杂质的相当保留时间列出在表三。按下式计算盐酸缬更昔洛韦中各杂质所占百分比：
100(ri / Fi) /(ri / Fi)
其中，ri 为单个杂质的峰面积，Fi 为表三中列出的各个成分的相对响应因子。各杂质应符合表三中相关要求。
测试2
溶液A——取2.5mL三乙胺，用水稀释至1000mL，再用三氟乙酸调节pH值至3.0±0.05。用0.45μm滤膜过滤并脱气。可进行适当调整。（见色谱法项下系统适用性（621）） 溶液B——甲醇
流动相——使用溶液A与溶液B进行线性洗脱，见表二，可适当调整。（见色谱法项下系统适用性（621））
系统适用性溶液——按含量测定项下要求配制。 供试品溶液——使用含量测定项下的供试品溶液。 色谱系统（见色谱法（621））——使用液相色谱仪，检测波长254nm，色谱柱为涂布L1固定相的4.6mm×15cm色谱柱，色谱程序见表二。
表二 时间（min） 溶液A（%） 溶液B（%） 洗脱法 等度 0-10 93 7 93→70 7→30 梯度 10-20 （注：进样间隔需用流动相平衡至少15min）
柱温为30℃，流速为1.0mL/min。用系统适用性溶液进样，记录色谱图，缬更昔洛韦的两个峰（R与S的 L-缬氨酸酯）不得小于1.3；理论塔板数按缬更昔洛韦第二个峰计算不得低于8000；缬更昔洛韦第二个峰的拖尾因子不得过1.2。（注：通常缬更昔洛韦第二个峰的保留时间为6~9min。）
操作——取20μL供试品溶液进样，记录色谱图，计算相关峰面积。按下式计算盐酸缬更昔洛韦中更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸所占百分比：
100(ri / Fi)/(ri / Fi)
其中，ri 为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸的相关峰面积总和，Fi 为表三中列出该成分的相对响应因子。杂质应符合表三中相关要求，该杂质限度应符合表三中的要求。
表三 成分 通用名 测试法 相对保留相对响最大限度时间 应因子 （%） 缬更昔洛韦 缬更昔洛韦 — 1,2 1 1 更昔洛韦 Aa 1 0.42 1.4 1.5 鸟嘌呤 Ba 1 0.28 1.9 0.25 甲氧基甲基鸟嘌呤 Ca 1 0.81 1.0 0.3 异缬更昔洛韦 Da 1 1.26 1.0 0.5 单乙酰氧基更昔洛韦 Ea 1 1.36 1.3 0.15 F（其它已更昔洛韦间缬氨酸酯 1 1.61 0.71 0.1 确定杂质） Ga，b 缬更昔洛韦同源物 1 1.66 1.0 0.25 — H 1 1.47 1.3 0.1 — I 1 1.52 1.4 0.1 （其它已确J更昔洛韦单丙酸酯 1 2.09 1.1 0.15 定杂质） 缬更昔洛韦二聚物Ka 1 2.49 1.0 0.1 （立体异构体A） 缬更昔洛韦二聚物La 1 2.52 1.0 0.1 （立体异构体B） 缬更昔洛韦二聚物Ma 1 2.54 1.0 0.1 Nab ，其它已确定杂质 未确定杂质 总杂质 （立体异构体C） 更昔洛韦 单-N-甲基 缬氨酸酯 — — — 2 1 1与2 1.2 — — 1.0 1.0 1.0 — 0.3 单个0.1；总共0.25 单个0.1；总共0.25 3.0 1与2 — a：特殊杂质 b：非对映异构体总和
非对映异构率——按有关物质项下测试1法检测，按下式计算缬更昔洛韦（R与S的 L-缬氨酸酯）的百分含量：
100[rA (rA + rB)] 100[rB (rA + rB)]
其中，rA 与rB 分别为缬更昔洛韦（R与S的 L-缬氨酸酯）峰面积。非对映异构率为（45:55）到（55:45）。
缬更昔洛韦对映体纯度
流动相——用1000mL水溶解16.2g高氯酸，用0.5μm以下滤膜过滤，脱气。可适当调整。（见色谱法项下系统适用性（621））
系统适用性溶液——分别精密称取5mg USP 盐酸缬更昔洛韦标准品与0.5mg USP D-缬更昔洛韦标准品置于同一25mL容量瓶，用0.001 N 盐酸定容。 供试品溶液——精密称取10mg盐酸缬更昔洛韦置于50mL容量瓶，用0.001 N 盐酸定容。
色谱系统（见色谱法（621））——使用液相色谱仪，检测波长254nm，色谱柱为涂布L66固定相的4.0mm×15cm色谱柱，柱温为室温，流速为0.8mL/min。用系统适用性溶液进样，记录色谱图，D-缬氨酸酯的第二个峰与缬更昔洛韦的第一个峰的分离度不得小于3.5；理论塔板数按缬更昔洛韦第二个峰计算不得低于1800。
操作——取20μL供试品溶液进样，记录色谱图，计算相关峰面积。按下式计算对映体纯度百分数：
100[rS / (rS + rIM)]
其中，rS 为缬更昔洛韦（R与S的 L-缬氨酸酯）相关峰面积总和，rIM 为各自相关对映体杂质（R与S的 D-缬氨酸酯）峰面积总和。对映体纯度不得小于97.0%。
含量测定
0.10 M磷酸二氢铵溶液——取11.5g磷酸二氢铵溶解于900mL水中，用磷酸（85%）调节pH值至2.8±0.2，再用水定容至1000mL。 流动相——0.10 M 磷酸二氢铵溶液-甲醇=（92：8）。可适当调整。（见色谱法项下系统适用性（621））
系统适用性溶液——分别精密称取10mg USP 盐酸缬更昔洛韦标准品与0.5mg USP 甲氧基甲基鸟嘌呤标准品置于同一50mL容量瓶，用0.001 N 盐酸定容。 标准溶液——精密称取一定量的USP 盐酸缬更昔洛韦标准品，以0.001 N 盐酸为溶剂，制成浓度为0.2mg/mL的溶液。
供试品溶液——精密称取本品一定量，以0.001 N 盐酸为溶剂，制成浓度为0.2mg/mL的溶液。
色谱系统（见色谱法（621））——使用液相色谱仪，检测波长254nm，色谱柱为涂布L1固定相的4.6mm×15cm色谱柱，柱温为25℃，流速为1.0mL/min。用系统适用性溶液进样，记录色谱图，相关项应符合有关物质项下测试1的系统适用性要求。用标准溶液进样，记录色谱图，重复进样时，校正因子（CF）的RSD不得过1.0%。（注：CF按操作项下公式计算）
操作——分别取等体积（20μL）标准溶液与供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图，计算相关峰面积。按干燥品计算盐酸缬更昔洛韦中C14H22N6O5·HCl的百分含量，公式如下：
100[(rU / WU)(CF )(100) /(100 – SU)]
其中，rU 为供试品溶液中相关峰面积（盐酸缬更昔洛韦两个峰面积总和）；WU 为供试品溶液中盐酸缬更昔洛韦的重量（mg）；CF为校正因子；SU为供试品中溶剂与水分的总百分含量。 CF计算公式：
(WS / RS)[(100 – SS) /100]
其中，WS为标准溶液中USP 盐酸缬更昔洛韦标准品的重量（mg）；RS为标准溶液中缬更昔洛韦两个峰面积总和；SS为USP 盐酸缬更昔洛韦标准品中溶剂与水分的总百分含量。
辅助信息——请先参考FAQs，再联系USP。
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