胱抑素C检测试剂盒性能评价研究
目的：评价国内某公司胱抑素C（CysC）试剂性能指标，探讨其临床应用可行性。方法：利用奥林巴斯Au640对CysC试剂盒进行准确度、重复性、稳定性、线性范围等方法学评价。结果：正常值质控和病理值质控测定偏倚分别为1.8%和1.6%，远小于试剂说明书要求的<15%；批内变异百分率分别为0.8%和2.5%，小于试剂说明书要求的<5%；天间变异百分率分别为2.3%和2.2%，小于试剂说明书要求的<10%。在0-8.0mg/L浓度范围内，复相关系数R2为0.9978，说明预期值与测量值之间相关性极好；斜率b1=0.9703，在0.97-1.03之间，从经验上判断，斜率与1之间无差异，截距b0=0.0214，与0之间无差异，表明：该试剂在实验所涉及的浓度范围内（0-8.0mg/L）检测结果成线性。结论：国内某公司胱抑素C（CysC）试剂各方面性能指标优异，适于临床应用。
标签：胱抑素C；性能评价
【Abstract】 Objective：To evaluate the performance of a test kit for cystatin c（CysC）.Methods：A series of methodological evaluation experiment including the accuracy，repeatability，stability and linear range of the CysC reagent were carried out on the Olympus Au640 biochemistry analyzer.Results：The experiments showed that the bias of detection results of normal value control serum and pathological value control serum were 1.8% and 1.6 %，respectively，which were far less than the fifteen percent of the reagent instruction.The intra-assay coefficient of variation（CV）of normal and pathological control serum were 0.8% vs.2.5%，which were less than the five percent of the reagent instruction.While the inter-assay CV of normal and pathological control serum were 2.3% vs.2.2%，which were less than the ten percent of the reagent instruction.The experiments for linear range evaluation showed that R2 was 0.9978 in the concentration range of 0-8.0mg/L，which suggested that the correlation between expected value and measured value was very well.Otherwise，the slope rate b1 with 0.9703and the intercept b0 wtih 0.0214 were both showed that the detection results of CysC reagent were linear in the concentration of 0-8.0mg/L.Conclusion：The performance of a certain internal cystatin c（CysC）kit was very good in accuracy，repeatability，stability，and linear range.
【Key words】 cystatin c；performance evaluation
胱抑素C（cystatinC，CysC）是新近发展起来的评价早期肾功能损伤的一个敏感性好、特异性高的指标。在肾脏疾患、糖尿病、冠心病等方面都有广泛的应用。随着分子生物学技术的发展，CysC的检测技术不断提高，为临床的研究和应用提供了技术上的可能性和可行性，成为国内外研究的热点。CysC临床意义广泛，但试剂比较昂贵，为了寻求同样的质量保证又能降低试剂成本，我们对国内某公司CysC试剂性能进行了评价。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
日本奥林巴斯公司生产的Au640全自动生化分析仪；国内某公司CysC试剂及其配套的标准品、质控品。
l.2 样本准备
（1）准备好足够实验用量的同一批次CysC正常值质控和病理值质控；（2）选定好一高值病人血清；（3）每天随机抽取住院门诊病人及健康体检人群新鲜全血5个，连续10天，保证分离血清后2h内完成检测。
1.3 实验方法
1.3.1 准确度实验 测定配套的正常值和病理值质控，分别测定三次，计算均值，参考质控参考说明书，计算偏倚，分析检测结果是否符合说明书标定的准确度标准。偏倚=（均值-靶值）/靶值。接收准则：按照说明书要求。
1.3.2 重复性实验（批内精密度）根据CLSI的EP5-A2文件，对于精密度评价的要求，分别测定配套正常值质控、病理值质控，各连续测定20次，分别计算均值、SD与CV%，验证试剂的批内精密度是否符合说明书标定的标准。接收准则：按照说明书要求。1..3.3 稳定性实验（天间精密度）分别测定配套正常值质控，病理值质控，连续测定10天，每天测两次（间隔至少2h），计算总的精密度，以CV%表示。接收准则：按照说明书要求。
1.3.4 线性范围评估实验 将高值病人标本采用生理盐水按照10/0、9/1、8/2、7/3、6/4、5/5、4/6、3/7、2/8、1/9、0/10的比例稀释，依次进行测定，将预期值为X，测量值为Y，做散点图，进行直线回归分析，确定试剂的线性范围。
1.4 统计学处理
采用SPSS V11.0软件对实验数据进行统计学分析。采用EXCEL 2003软件做散点图，并进行直线回归分析。
2 结果
2.1 准确度实验
正常值、病理值质控3次测定偏倚分别为1.8%和1.6%，远小于试剂说明书要求的<15%（见表1）。
2.2 重复性实验（批内精密度）
正常值、病理值质控天内20次测定批内变异百分率分别为0.8%和2.5%，
小于试剂说明书要求的<5%（见表2）。
2.3 稳定性实验（天间精密度）
正常值、病理值质控天间20次测定变异百分率分别为2.3%和2.2%，小于试剂说明书要求的<10%（见表2）。
2.4 线性范围评估实验
从图1可知，R2=0.9978，说明预期值与测量值之间相关性极好；b1=0.9703，在0.97-1.03之间，从经验上判断，斜率与1之间无差异，b0=0.0214，与0之间无差异，表明：该方法在实验所涉及的浓度范围内（0-8.0mg/L）成线性。
3 讨论
胱抑素C是1961年首先由Clausen于脑脊液中发现，后于上世纪80年代才被正式命名为半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，简称胱抑素C（CysC）[1]。
胱抑素C是一种低分子非糖基化碱性蛋白，也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白[2]，属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员，包含120个氨基酸残基多肽链。胱抑素C由管家基因调控，人体有核细胞内均有表达，并以恒定的速度产生，相对分子质量小，可自由通过肾小球滤过膜，几乎全部被近曲小管上皮吸收并代谢分解，不会再进入血循环；肾小管不分泌胱抑素C，不会引起尿胱抑素C的假性增加；不受性别、年龄、饮食、体重及机体代谢等因素的影响[3]。
CysC主要生理作用是参与细胞内外蛋白水解的调控，抑制半胱氨酸蛋白酶的活性，从而使细胞免受不适当的内源性或外源性蛋白酶水解。在细胞内蛋白质多肽代谢、激素原的蛋白质分解过程、胶原代谢及肿瘤细胞穿透正常组织过程中发挥重要作用[4]。
研究表明，在出生时，CysC的值最高约为2.16 mg/L，平均值大约是成年人的2倍，1岁后趋于稳定与成人值接近，这可能与肾脏未发育成熟有关。
有文献报道，CysC的个体间变异非常小，个体间变异仅为25%，一般CysC在人群中的最高值与正常人均值之间的差异不超过3～4个标准差。
胱抑素C含量升高或降低直接与多种疾病有关，不仅在肾脏疾病方面有临床价值，在儿科疾病、心血管疾病、肿瘤化疗及肾移植等方面的应用也有很高的临床价值。胱抑素C临床意义广泛，但试剂比较昂贵，大大限制了CysC的广泛开展。所以很有必要选择一个物美价廉的试剂品牌。
本实验室通过测定配套的正常值和病理值质控做准确度实验，计算偏倚分别为1.8%和1.6%，远小于试剂说明书要求的<15%。批内精密度实验测定配套的正常值质控和病理值质控变异百分率分别为0.8%和2.5%，小于试剂说明书要求的
<5%；天间变异百分率分别为2.3%和2.2%，小于试剂说明书要求的<10%。线性范围评估实验结果表明，在0-8.0mg/L浓度范围内，R2为0.9978，说明预期值与测量值之间相关性极好；b1=0.9703，在0.97-1.03之间，从经验上判断，斜率与1之间无差异，b0=0.0214，与0之间无差异，表明：该方法在实验所涉及的浓度范围内（0-8.0mg/L）成线性。
综上所述，国内某公司胱抑素C（CysC）试剂各方面性能指标优异，适于临床推广使用。
参考文献
[1]周碧燕，吴署粤.胱抑素C与心血管疾病关系[J].内科，2011，6（5）：480-482.
[2]起丽.浅谈胱抑素C（CYSC）的临床应用[J].按摩与康复医学，2011，（48）：72.
[3]赵开亮，麦泉云.血清胱抑素-C对心源性休克患者急性肾损伤的预测价值[J].广西医学，2011，33（9）：1127-1130.
[4]苏晓梅，姚艺雄，陈平等.检测尿微量白蛋白与血清胱抑素C对糖尿病早期肾功能损伤的临床探讨[J].按摩与康复医学，2011，（57）：49-50.
[5]胡琼，郑锦仁，杨靖.胱抑素C的临床研究进展与应用[J].中国医学检验杂志，2008，9（5）：299-302.
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