葡萄球菌属D-试验检测及临床应用

检验医学与临床２００９年１月第６卷第１期　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ　２００９，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．１　・　３９　・　葡萄球菌属Ｄ一试验检测及临床应用　黄剑芳（广东省惠州市中心人民医院检验中心　５１６００１）　【摘要】　目的通过葡萄球菌属【）Ｉ试验阳性检出情况了解葡萄球菌属对红霉素及诱导型克林霉素的耐药率。　方法　按美国临床实验室标准化委员会推荐红霉素（１５微克／片）和克林霉素（２微克／片）双纸片诱导试验（Ｄ－试验）　检测葡萄球菌属。结果　检测３６２株葡萄球菌属，其中５７株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌　试验阳性３２株　（５６．１　）、６２株耐甲氧西林阴性葡萄球菌【）Ｉ试验阳性３３株（５３．２％）。结论　通过Ｄ一试验检测诱导型克林霉素耐　药有助于临床医生合理使用抗生素。　【关键词】　葡萄球菌属；　Ｉ）－试验；　红霉素；　诱导型克林霉素　中图分类号：Ｒ４４６　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—９４５５（２００９）０１　００３９—０１　葡萄球菌属是目前引起医院和社区感染的常见病原菌，耐　由表１可见，３６２株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌１３９株，　甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）也是主要的致病菌。随着大环内酯　阴性葡萄球菌２２３株。　类与克林霉素抗生素的广泛应用使其对葡萄球菌的耐药性明　２．２葡萄球菌Ｉ）＿试验阳性结果　见表２。由表２可见，１１９　显上升，而使葡萄球菌对各种抗生素产生多重耐药。常规药敏　株葡萄球菌均为红霉素耐药，克林霉素敏感。其中ＭＲＳＡ　５７　试验不能检测诱导型克林霉素的耐药情况，间接影响临床医生　株、ＭＲＣＮＳ　６２株。　用克林霉素治疗的抗菌效果。本实验通过双纸片法诱导试验　表２葡萄球菌Ｉ）Ｉ试验阳性结果　（Ｄ－试验）检测诱导型克林霉素的耐药情况，以指导临床医生合　理使用抗生素。　１材料与方法　１．１标本来源　３６２株葡萄球菌均为２００７年４—１Ｏ月本院　临床分离到的菌株。金黄色葡萄球菌１３９株、凝固酶阴性葡萄　球菌２２３株。其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）５７　注：Ｅ为红霉素，ＣＬ为克林霉素，Ｓ为敏感。　株，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）６２株。　１．２仪器与试剂　德灵ＭｉｃｒｏＳｃａｎ－４微生物分析仪及其相配　３讨　论　套的生化鉴定板、红霉素（１５微克／片）和克林霉素（２微克／片）　诱导型克林霉素耐药存在地区性差异。本研究表明，ＭＲ—　由杭州天和微生物有限公司提供、ＭＨ琼脂由广东环凯微生物　ｓＡ　Ｉ）Ｉ试验阳性率５６．１　，ＭＲＣＮＳ　Ｄ－试验阳性率５３．２　。与　科技有限公司提供。　深圳中医院报道Ｅ—Ｒ＋ｃＩ　一ｓ表型葡萄球菌中诱导耐药率为　１．３质控菌株　标准菌采用金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ　２５９２３）　５４．３　结果大致相当　］。　作为质控菌株，由卫生部临床检验中心提供。红霉素和克林霉　葡萄球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要有两种：　素对质控菌株均在美国临床实验室标准化委员会（ＮＣＣＬＳ）允　（１）抗生素作用靶位改变，即产生一种由ｅｒｍ基因编码２３Ｓ　许抑菌范围内。　ｒＲＮＡ甲基化，从而导致大环内酯类、林可酰胺类耐药；（２）编　１．４药敏试验操作严格按２００６年版ＮＣＣＬＳ推荐的方法，　码外排蛋白的质粒基因ｍｓｒ可介导细菌对】４和１５环大环内　采用标准纸片扩散法（Ｋ—Ｂ法）进行试验。将浓度为０．５　Ｍ的　酯（红霉素）和链阳菌素Ｂ的耐药，但对林可酰胺类（克林霉　待测葡萄球菌均匀涂布于４　ｍｍ厚度ＭＨ琼脂平板上，克林霉　素）敏感。由ｅｒｒｎ基因介导的耐药又分为结构型和诱导型两　素纸片与红霉素纸片间距为ｌ５—２６　ｍｍ，经３５℃恒温箱孵育　种＿２］。结构型耐药表型红霉素和克林霉素均耐药，一般可通过　１８—２４　ｈ。试验中红霉素耐药，克林霉素敏感（１５—２２　ｒａｍ）且　试验检测；诱导型耐药表型是红霉素耐药但克林霉素敏感。诱　克林霉素抑菌环在靠近红霉素侧出现切迹呈英文大写字母　导型克林霉素耐药用目前使用仪器无法测定，必须借助　试　“Ｄ”。为Ｉ）．试验阳性或判读红霉素对克林霉素具有诱导耐药；　验（即克林霉素诱导耐药试验）才能检测出来。　抑菌环形状保持不变，则判定为【）＿试验阴性。　ＭＲＳ对所有８一内酰胺类药物均耐药。因此，临床治疗　２结　果　ＭＲｓ所致感染应考虑使用大环内酯类（红霉素）、林可酰胺类　２．１葡萄球菌对红霉素和克林霉素的不同耐药表型　见　（克林霉素）和链阳霉素类等抗生素Ｉ・　】。大环内脂类（红霉素）　表１。　和林克酰胺类（克林霉素）对革兰阳性葡萄球菌抗菌活性强，且　表１　葡萄球菌对红霉素和克林霉素不同耐药表型　药理相近。随着大环内酰类抗生素的广泛使用，其耐药性增　加，诱导型克林霉素耐药率也随之增加。其表现为红霉素耐药　而克林霉素敏感，但通过大环内酯类药物（红霉素）诱导后则表　现为克林霉素耐药＿３］。诱导型克林霉素耐药菌株在体外试验　敏感，但用于临床却无活性。因此，　试验对诱导型克林霉素　耐药是简单易行的试验。只需要在常规药敏试验时将红霉素　注：Ｅ为红霉素，ＣＬ为克林霉素，Ｒ为耐药，Ｓ为敏感。　和克林霉素纸片按间距为１５～２６　Ｉｎｍ即可观察诱导耐药　表型。　（下转第４１页）　检验医学与临床２００９年１月第６卷第１期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ．Ｊａｎｕａｒｙ　２００９，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．１　・４１・　续表２斑贴试验变应原阳性结果　病史中提供明确的致敏原，或持续接触致敏原而致湿疹迁延难　愈，因此斑贴试验作为一项安全、有效的辅助诊断方法在慢性　湿疹的诊断及防治中都有重要意义＿３］。　本组研究中４６２例慢性湿疹患者斑贴试验的阳性率高达　８５．５Ｏ　，而在性别和年龄上的分布差异无统计学意义，提示慢　性湿疹患者斑贴试验阳性率与年龄及性别差异无明显关联；皮　损局限型患者的斑贴阳性率虽高于皮损泛发型者，但差异仍无　统计学意义，考虑是否与样本不齐有关，有待扩大样本量以进　一步验证。２Ｏ种变应原中重铬酸钾的阳性率最高，且无明显　性别差异，由于重铬酸钾常存在于水泥粉尘、衣物染料、鞋油、　油漆、清洁剂、漂白剂等日常生活经常接触的物质中，较其他变　应原在慢性湿疹中具备更高的致敏性。男性病例中，卡巴混　合物的阳性率明显高于女性，差异有统计学意义（ｊＤ＜Ｏ．０１）。　卡巴混合物主要存在于天然橡胶制品中，可能与男性从事的职　业接触橡胶制品的机会多于女性有关。而女性病例中，芳香混　合物的阳性率明显高于男性，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。　芳香混和物主要作为香料，可能与女性更多地使用化妆品、洗　涤用品有关。随着社会经济的发展，日常生活中的化学物质越　来越多，多种致敏原同时引起慢性湿疹的可能性也随之增加。　本组资料显示．有超过半数的病例存在３种及以上的阳性变应　原，使患者难以脱离生活中的致敏原，给治疗增加了困难。　注：男女阳性数相比，　Ｐ＜０．０５；～Ｐ＜Ｏ．０ｌ。　自然界中已知的接触致敏原达２　０００余种，斑贴试验无法　对所有变应原进行检测，在诊断上仍有局限性。因此，在评价　２．４多种变应原阳性情况见表３。　斑贴试验时应结合患者病史，仔细询问患者日常接触到的可疑　表３　患多种变应原阳性结果　物质，并进行斑贴试验排查，以实现早期诊断，对疾病的防治及　变应原种　总阳性（％）　男阳性（％）　女阳性（　）　提高生活质量起到重要作用。　７８（１６．８８）　３７（１６．８２）　４１（１６．９４）　参考文献　１３１（２８．３５）　６４（２９．０９）　６７（２７．６９）　［１］赵辩．临床皮肤性病学Ｉ－Ｍ］．第３版．南京：江苏科技出版　８７（１８．８３）　３９（１７．７３）　４８（１９．８３）　社，２００６．　３６（７．７９）　１８（８．１８）　ｌ８（７．４４）　［２］孙传兴．临床疾病诊断依据治愈好转标准［Ｍ］．北京：人　２６（５．６３）　１３（８．９１）　ｌ３（５．３７）　民军医出版社，１９９８．　３７（８．０１）　２０（９．１０）　１７（７．０３）　［３］秦鸥，王学民．诊断性斑贴试验的临床应用［Ｊ］．临床皮肤　科杂志，２００７，１２（３６）：８００—８０２．　３讨　论　在皮肤科临床工作中，患者如能提供明确的致病原因或诱　（收稿日期：２００８—０７—１８）　因，对疾病的诊断和治疗都有很大的帮助，但多数患者不能在　（上接第３９页）　［３］　Ｂｅｒｎａｄｅｓｃｈｉ　Ｐ，Ｇｉｕｓｔａｒｉｎｉ　Ｇ，Ｍｏｎｔｅｎｏｒａ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏ—　根据２００４年ＮＣＣＬＳ建议　］，对于红霉素耐药、克林霉素　ｍｉｄｅ　ｐｌｕｓｍｏｎｔｈｌｙ　ｈｉｇｈ——ｄｏｓｅｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｉｎ　ｅｈｅｍｏｒｅ——　中介和敏感的葡萄球菌必须做ｆ）－试验。【）＿试验阴性报告克林　ｆｒａｃｔｏｒｙ　ｍｙｅｌｏｍａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａ　ｐｈａｓｅ　ＩＩ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　霉素敏感、　试验阳性时则报告克林霉素耐药，不用报告ＭＩＣ　ＩＪ］．Ｉｎ　Ｖｉｖｏ，２００６，２Ｏ（６Ａ）：７１９－７２０．　值ｌ５ｊ。通过　试验检出可准确检测诱导型克林霉素对葡萄球　［４］　沈定霞，罗燕萍，徐雅萍，等．葡萄球菌对红霉素和克林霉　菌的耐药性，笔者做Ｋ—Ｂ法药敏时应加强对葡萄球菌属Ｉ）＿试　素的诱导耐药性研究［Ｊ］．中华检验医学，２００５，２８（４）：　验的常规检测，有助于临床医生更合理选用大环内酯类及林可　４００—４０２．　霉素类抗生素。　［５］　Ｆｉｅｈｅｌｋｏｎ　ＫＲ，Ｃｒａｗｆｏｒｄ　ＳＡ，ＭｃＥｌｍｅｅｌ　ＭＬ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒａｃｔｉ—　参考文献　ｃａｌ　ｄｉｓｋ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｃｌｉｎｄａ—　ｍｙｃｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ￣　［１］周小梅，莫其农，李忠新．葡萄球菌中诱导型克林霉素耐　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｓｔａｐｈｙ１ｏｃ０ｃｃｉ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４１（１０）：　药的调查率观察分析［Ｊ］．深圳中西结合杂志，２００５，１５　４７４０　４７４４．　（３）：１３２－１３３．　［２］王明贵，张婴元．细菌对大环内酯类抗生素耐药机制的研　（收稿Ｈ期：２００８—０７—１５）　究进展［Ｊ］．国外医学抗生素分册，２０００，２１（１）：１３—１　５．