南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE—L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析

中国水产科学２０１１年１１月，１８（６）：１２３４—１２４２　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｉｓｈｅｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　ＤｏＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１１１８．２０１１．０１２３４　研究论文　南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ　Ｓ一腺苷同型半胱氨酸水解酶基　因的克隆及其生物信息学分析　王金慧，丁炳，简纪常，吴灶和　广东海洋大学水产学院；广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东湛江，５２４０２５　摘要：Ｓ－腺苷同型半胱氨酸水解酶（ｓ．ａｄｅｎｏｓｙ１．Ｌ．ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ，ＳＡＨＨ）是一种细胞内广泛存在的酶，在调　节生物体转甲基化反应中占据重要地位。本研究通过ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ．ＰＣＲ技术克隆了南极冰藻（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ）Ｓ．腺苷同型半胱氨酸水解酶全序列，命名为ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ。ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ全长１　８４４　ｂｐ，包括５　非编码区　３６　ｂｐ，３　非编码区３４４　ｂｐ，含有一个较长的ｐｏｌｙ（Ａ）尾。开放阅读框１　４６１　ｂｐ，编码４８７个氨基酸。根据推导的氨基　酸序列预测其分子量为５３．０　ｋＤ，理论等电点为５．１６。ＳｉｇｎａｌＰ　３．０、ＴＭＨＭＭ　Ｓｅｒｖｅｒ　ｖ．２．０、ＮｅｔＮＧｌｙｃ　１．０和ＮｅｔＰｈｏｓ　２．０预测结果显示，ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ蛋白不存在信号肽与跨膜区，含有１个Ｎ．糖基化位点及２３个磷酸化位点。利用　ＣｌａｓｔａｌＸ　２．０及ＭＥＧＡ　５．０软件，以邻位相连法对南极冰藻及其他物种ＳＡＨＨ构建系统进化树，结果显示，　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ与杜氏盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ　ｓａｌｉｎａ）、莱茵衣藻（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）、小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）　等有较近亲缘关系。利用ＳＷＩＳＳ．ＭＯＤＥＬ程序和ＰｙＭＯＬ　Ｖｉｅｗｅｒ软件成功模拟了ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ蛋白亚基的三维结　构，该结构包括２０个Ｏ，ｒ．螺旋和ｌ２个　．折叠，且存在３个结构域：Ｎ端底物结合域、ＮＡＤ结合域和Ｃ端域。可见，　ＳＡＨＨ基因存在于南极冰藻并进行了有效的表达，该蛋白定位于细胞质，进一步证实ＳＡＨＨ是一个进化上比较保　守的蛋白。　关键词：Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．；ＩＣＥ—Ｌ；　Ｓ－腺苷同型半胱氨酸水解酶；克隆；三维结构；生物信息学　中图分类号：Ｑ９３　文献标志码：Ａ　文章编号：１００５—８７３７一（２０１１）０６—１２３４—０９　众所周知，ｓ．腺苷蛋氨酸（Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅ．　的比率，ＳＡＨＨ活性的抑制将导致细胞内ＳＡＨ的　堆积，对转甲基反应产生反馈性抑制作用，从而　可以在各种水平上影响基因表达的效率【４。　］。　ｔｈｉｏｉｎｅ，ＳＡＭ）是细胞内广泛存在的甲基供体［１］。在　特异的转甲基酶作用下，其甲基可以转移到各种　生物受体（如：ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白、磷脂和其他小　分子物质）上，从而形成Ｓ．腺苷同型半胱氨酸　（ｓ—ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ＳＡＨ）。ｓ一腺苷同型半胱　氨酸水解酶（Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌ－Ｌ—ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ，　ＳＡＨＨ广泛存在于动物、植物、真菌及其他　微生物体内，由４个化学性质、功能都相同的亚基　组成。亚基的分子量为４５～５５　ｋＤ，每个亚基含有　一分子紧密结合的辅酶（ＮＡＤ　）ｌ８　］。ＳＡＨＨ是一种　ＳＡＨＨ，ＥＣ　３．３．１．１）催化ＳＡＨ水解生成腺苷　进化上相对保守的蛋白　刚，其氨基酸序列具有较　高的同源性，如鼠源ＳＡＨＨ与人类ＳＡＨＨ一致性　高达９７％　。　（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，Ａｄｏ）和同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，　Ｈｅｙ）。该反应是可逆的，体外趋向合成，体内趋向　水解［２。］。可见ＳＡＨＨ在调节生物体转甲基化反应　中占据着重要地位，它的活性取决于ＳＡＭ与ＳＡＨ　该酶在各种生物的生长发育、繁殖和代谢等　生理过程中，具有重要的作用。目前对ＳＡＨＨ基　收稿日期；２０１１—０３—２６；修订日期；２０１１－０７—０５．　基金项目：国家自然科学基金资助项目（４０８７６１０２）；广东省自然科学基金资助项目（￥２０１　１０１０００５８８５）．　作者简介：王金慧（１９８６一），女，硕士研究生，研究方向为海洋微生物学与病害防治．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｅｉｄｉｈｅｄｙ＠１６３．ｃｏｒｎ　通信作者：丁烯，博士，教授，主要研究方向为海洋微生物学与病害防治．Ｅ．ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｙ＠ｇｄｏｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　第６期　王金慧等：南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ　Ｓ－腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析１２３５　因的研究，多集中在其介导ＤＮＡ甲基化机理及　其与疾病的相关性研究，并已从多种微生物体内　（如古硫化细菌［　，　】、酵母菌［１３］、枯氏锥虫　Ｈ　等）　克隆了ＳＡＨＨ的基因全长。由于ＳＡＭ是生物合　成多胺和乙烯的前体，因此其与植物的抗逆性有　一定的关系，ＳＡＨＨ在抗逆反应中也具有重要地　位。Ｓｈａｒｍａ　Ｌｌ　５Ｊ等研究发现，遏蓝菜（Ｔｈｌａｓｐｉ　ａＦ—　ｖｅｎｓｅ）的ＳＡＨＨ基因参与抗低温胁迫调节；草菇　在低温处理时，ＳＡＨＨ及ＳＡＨＨ同源基因的　ｍＲＮＡ含量会迅速增加［１６－１７］，与低温适应呈正相　关。ＭａｓｕｔａＨ８］等在烟草中表达ＳＡＨＨ基因研究植　物抗病毒反应时，发现可以提高烟草的抗病毒能　力。由于南极独特的地理和气候特征，形成了一　个干燥、酷寒、强辐射、高盐度和低光照的自然　环境，南极冰藻具备了相应独特的生理、生化和　分子机制，以适应极端的环境［１９－２０】。ＳＡＨＨ作为　一种抗逆相关酶，在南极冰藻的极端环境适应尤　其是低温适应中也应具有较为重要的地位，但至　目前为止，关于南极冰藻ＳＡＨＨ的研究尚未见相　关报道。本研究拟通过ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＡＣＥ—ＰＣＲ等　技术，从南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ中克　隆ＳＡＨＨ基因ｃＤＮＡ全序列，并对其序列特征、　亚基结构等进行具体分析。以期了解南极冰藻　ＳＡＨＨ基因的结构、功能与特性，期望通过后续　更深入的研究能够从ＳＡＨＨ的角度阐明南极冰藻　对极端环境的适应机制；并可以有效地保护和利用　南极低温酶基因资源，为转ＳＡＨＨ基因抗逆性遗传　育种奠定基础，具有较重要的理论与应用价值。　１材料和方法　１．１藻种来源及培养方法　南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ由国家海　洋局第一海洋研究所海洋生物活性物质重点实验　室惠赠。Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ的培养液采用　Ｐｒｏｖａｓｏｌｉ培养基Ｌ２¨，于三角瓶中培养。放在可控　温光照的培养箱中，培养温度６～８℃，光强为１　３００～ｌ　９００　ｌｘ，光照周期为１２　ｈ光／１２　ｈ暗。不充　气，每天摇动３～４次，每隔１４　ｄ以２０％为接种量，　将藻体转移到新的培养基中以维持细胞的对数生　长。南极冰藻培养所需的海水采自湛江海域，盐　度约为３３。　１．２其他试验材料　ＲＮＡ提取试剂ＴＲＩＺＯＬ＠Ｒｅａｇｅｎｔ购自　Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，５　／３　ＲＡＣＥ　Ｋｉｔ购自罗氏公司，　ｄＮＴＰｓ、ＥｘＴａｑ酶、ｒＴａｑ酶及Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｍ．ＭＬＶ（Ｒｎａｓｅ　Ｈ．）购自ＴａＫａＲａ公司。　大肠杆菌ＤＨ５ａ由广东省水产经济动物病原　生物学及流行病学重点实验室保存。　１．３南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ总ＲＮＡ　的提取　按ＴＲＩＺＯＬ固Ｒｅａｇｅｎｔ试剂的操作程序稍加改动，　具体步骤如下：用１．５　ｍＬ无ＲＮＡ酶ＥＰ管离心收　集对数期藻细胞，１０　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，４。Ｃ；弃　上清，加１　００　ｇＬ　Ｔｒｉｚｏｌ，用组织匀浆器研磨充分，补　加９００　ｇＬＴｒｉｚｏｌ，剧烈震荡３０　Ｓ，冰上放置５　ｍｉｎ使　细胞充分裂解；加入２００　ｇＬ氯仿，剧烈震荡３０　Ｓ，冰　上静置５　ｍｉｎ，缓加２００　ｇＬ　３　ｍｏｌ・Ｌ～ＮａＡｃ，静置２　ｍｉｎ，１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１５　ｍｉｎ，４￣Ｃ；取上清液加入　５００　ＣＩ（氯仿：异戊醇＝２４：１），充分混匀，１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，４℃；取上清液加入５００　异　丙醇，充分混匀，一２０￣Ｃ沉淀１　ｈ；１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心　ｌＯｍｉｎ，４ｏＣ，弃上清液，７５％乙醇洗涤１～２次；室温　晾干并吸出管壁水分，加２Ｏ　ｇＬＲＮＡｆｒｅｅ　Ｈ２Ｏ溶解　ＲＮＡ，一８０￣Ｃ保存。１．０％琼脂糖凝胶电泳检测。　１．４引物设计　从ＮＣＢＩ下载已报道的ｓ。腺苷同型半胱氨酸　水解酶基因的氨基酸序列并进行序列比对，根据　其保守区设计简并引物Ｐ１。以Ｐ１为上游引物，　３＇ＰＣＲ锚定引物为下游引物进行３　Ｒａｃｅ—ＰＣＲ扩　增。根据３　ＡＲＣＥ获得的３　端ｃＤＮＡ序列，应用　Ｐｒｉｍｅｒ　Ｐｒｅｍｉｅｒ　５．０及Ｏｌｉｇｏ　６．０软件设计３条基因　特异性引物（分别命名为ＧＳＰ１、ＧＳＰ２、ＧＳＰ３），进　行５＇Ｒａｃｅ—ＰＣＲ扩增。基因克隆所用引物见表ｌ。　１．５　ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ－ＰＣＲ　采用Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｍ．ＭＬＶ（Ｒｎａｓｅ　Ｈ一）　和３＇ａｄａｐｔｅｒ引物进行３＇Ｒａｃｅ　ｃＤＮＡ一链的合成，体　系为２０　，操作按照Ｍ—ＭＬＶ说明书进行。ＰＣＲ　１２３６　中国水产科学　第ｌ８卷　３　Ｔ　５　ＲＴ　３　Ｒａｃｅ　３　Ｒａｃｅ　５　Ｒａｃｅ　５　Ｒａｃｅ　３　ａｄａｐｔｅｒ　５　ｏｌｉｇｏｄＴ－ａｎｃｈｏｒ　Ｐｌ　３　ＰＣＲ　ａｎｃｈｏｒ　ＧＳＰ１　ＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＧＣＡＧＡＧＴＡＣＴ（３０）ＶＮ　ＧＡＣＣＡＣＧＣＧｒｒＡＴＣＧＡＴＧＴＣＧＡＣＴｆ　１　６　ＳＴＴＹＴＧＲＴＹＧＴＹＡＡＹＧＴＴＧＣ　ＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＧＣＡＧＡＧＴ　ＣＣＡＡＣＡＴＣＴＣＣＡＴＡＧＣＣＡＧＣＡ　ＡＡＣＴＴＴＧＡＣＴＴＧＧＴＧＡＣＡＧ　ＡＣＡ　ｒＣＴＴＣＡＡＣＴＣＡＧＣＧ　ＧＡＣＣＡＣＧＣＧ１ｌＡＴＣＧＡＴＧＴＣＧＡＣ　ＧＳＰ２　ＧＳＰ３　５　Ｒａｃｅ　５　Ｒａｃｅ　５　一ａｎｃｈｏｒ　ｐｒｉｍｅｒ　注：Ｙ＝Ｃ／Ｔ＇Ｓ：Ｇ／Ｃ，Ｒ：Ａ／Ｇ．　Ｎｏｔｅ：Ｙ＝Ｃ／Ｌ　Ｓ：Ｇ／Ｃ，Ｒ：Ａ／Ｇ．　扩增反应体系为５Ｏ　，按照ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ　ＰＣＲ分别　设计程序（９４￣Ｃ　５　ｍｉｎ；９４　６０　Ｓ，５０　６０　Ｓ，７２℃　６０　Ｓ，５　ｃｙｃｌｅｓ；９４℃６０　Ｓ，４８￣（２　６０　Ｓ，７２℃６０　Ｓ，５　ｃｙｃｌｅｓ；９４℃６０　Ｓ，４５℃６０　Ｓ，７２℃６０　Ｓ，２５　ｃｙｃｌｅｓ；　ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／）、ＴＭＨＭＭ　Ｓｅｒｖｅｒ　Ｖ．２．０（ｈｔｔｐ：／／　Ⅵ　ｖｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、ＮｅｔＮＧｌｙｃ　１．０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＮＧｌｙｃ／１和　ＮｅｔＰｈｏｓ　２．０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＰ　７２℃１０　ｍｉｎ）；采用５　／３　ＲＡＣＥ　Ｋｉｔ，２ｅｄ　Ｇｅｎｅｒａ—　ｔｉｏｎ（Ｒｏｃｈｅ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）试剂盒，按照试剂　ｈｏｓ／），分别预测蛋白质分子的信号肽、跨膜区、　Ｎ一糖基化位点及磷酸化位点。利用在线软件　ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｓｅａｒｃｈ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．　盒的步骤进行５　Ｒａｃｅ—ＰＣＲ，其中反转录一纯化＿力口Ａ　尾整个过程连续完成，以防止５＇Ｒａｃｅ　ｃＤＮＡ一链的　ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ／）进行蛋白质分子功能域预　降解。ＰＣＲ产物在１２０　Ｖ电压下经１．０％琼脂糖凝　胶电泳检测，使用Ａｇａｒｏｓｅ　Ｇｅｌ　ＤＮＡ　Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ　Ｖｅｒ．２．０（ＴａＫａＲａ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）试剂盒切胶回收。　１．６　ＰＣＲ产物的分子克隆及测序　测。亚细胞初步定位分析通过在线分析软件Ｔａｒｇｅ　ｔＰ　１．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／Ｔａｒ　ｇｅｔ　Ｐ／）和　ＷｏＬＦ　ＰＳＯＲＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｏｌｆｐｓｏｒｔ．ｏｒｇ／）进行预测。利　用软件ＣｌｕｓｔａｌＸ２和ＤＮＡＭＡＮ　Ｖｅｒｓｉｏｎ７．０进行氨　基酸同源比对分析。利用ＥｘＰＡＳｙ服务器的　ＳＷＩＳＳ—ＭＯＤＥＬ［２３１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗｓｗｉｓｓｍｏｄｅ１．ｅｘｐａｓｙ．　．按照说明书操作步骤，将ＰＣＲ产物连接到　ｐＭＤ１８一Ｔ载体（ＴａＫａＲａ）上，然后转化大肠杆菌　ＤＨ５￣ｔ感受态细胞，在含ＩＰＴＧ／Ｘ．Ｇａｌ的Ａｍｐ　／ＬＢ　ｏｒｇ／）程序进行建模并通过３Ｄ结构分析软件　ＰｙＭＯＬ　Ｖｉｅｗｅｒ进行分析。　平板上进行筛选，挑取阳性克隆送至深圳华大基　因科技有限公司测序。　１．７生物信息学分析　利用ＮＣＢＩ（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂ１．　２结果与分析　２．１　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ基因的全长克隆　ａｓｔ．ｃｇｉ）在线工具，进行序列同源性比对和相似性　分析；利用ＤＮＡＭＡＮ　Ｖｅｒｓｉｏｎ７．０（Ｌｙｎｎｏｎ　Ｂｉｏｓｏｆｔ，　ＵＳＡ）软件对序列进行拼接；采用ＧＥＮＥＴＹＸ　７．０（Ｓｏｆｔｗａｒｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ＣＯ．。Ｌｔｄ）和ＯＲＦ　Ｆｉｎｄｅｒ　根据ＳＡＨＨ同源保守序列设计简并引物Ｐｌ进　行３＇ＲＡＣＥ，ＰＣＲ扩增后得到１　２９０　ｂｐ的３　端ｃＤＮＡ　序列。根据所得３　端序列，设计３条基因特异性引　物ＧＳＰ１、ＧＳＰ２和ＧＳＰ３进行５　ＲＡＣＥ，经过两轮　ＰＣＲ扩增获得５７４　ｂｐ的ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ基因５　端　在线分析软件推导其氨基酸序列、预测其分子量　计算值（Ｍｗ）和理论等电点（ｐＩ）并确定其开放阅读　框（０ＲＦ）；使用Ｃｌａｓｔａｌ　Ｘ２．０及ＭＥＧＡ　５．０软件，以　ｃＤＮＡ序ＹＯ；采用ＤＮＡＭＡＮ　７．０软件对３’和５　端序　列进行拼接，得到长度为１　８４４　ｂｐ的基因全序列，　邻位相连法（ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ）　构建系统进化树。　通过在线分析软件ＳｉｇｎａｌＰ　３．０（ｈｔｔｐ：１１、＾　ｃｂｓ．ｄｔｕ．　将其命名为ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ（图１）。ＧｅｎＢａｎｋ登录号为：　ＨＭ７４８３２６　第６期　王金慧等：南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ　Ｓ－腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析１２３７　２．２　ＩＣＥ－ＬＳＡＨＨ基因的序列分析　预测发现该蛋白不存在跨膜区。亚细胞初步定位　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ基因包括５　非编码区３６　ｂｐ、开　分析，显示ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ可能来源于细胞质。　放阅读框（ＯＲＦ）、３啡；编码区３４４　ｂｐ和一个较长的　ＮｅｔＮＧｌｙｃ　１．０预测仅发现１个Ｎ．糖基化位点，位　ｐｏｌｙ（Ａ）尾。其中ＯＲＦ　１　４６１　ｂｐ，编码氨基酸４８７个　于第２３３个氨基酸处（弱。ＮＤＳＶ）；ＮｅｔＰｈｏｓ　２．０预测　（图１）。根据推导的氨基酸序列预测其分子量（Ｍｗ）　发现共有２３个磷酸化位点，包括９个丝氨酸磷酸　为５３．０　ｋＤ，理论等电点（ｐＩ）为５．１６。　化位点、７个苏氨酸磷酸化位点和７个酪氨酸磷　以ＳｉｇｎａｌＰ　３．０　Ｓｅｒｖｅｒ程序对ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ基　酸化位点，表明磷酸化是该蛋白翻译后修饰的主要　因所推导的氨基酸序列进行Ｎ端信号肽结构的预　方式之一Ｌ５Ｊ。对ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ蛋白功能域预测分析，　测，未发现有信号肽序列；ＴＭＨＭＭ　Ｓｅｒｖｅｒ　ｖ．２．０　发现该蛋白存在两个ＳＡＨＨ基因标志序列：ＳＡＨＨ　１　ｃｔｔｔｔａｃｔｔｔａａｔｔｇｃｔａｇｃｃｃｃａｇｃａａｔｔｇｃｃａａｇＡＴＧＴＣＴＴＣＣＧＣＴＡＴＧＴＧＣＡＣＣＡＴＣ　６０　Ｍ　Ｓ　Ｓ　Ａ　Ｍ　Ｃ　Ｔ　Ｉ　６１　ＧＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＧＣＣＧＴＧＡＧＴＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＴＣＧＧＴ　１２０　Ｄ　Ｋ　Ａ　Ｔ　Ｔ　Ｇ　Ｒ　Ｅ　Ｙ　Ｋ　Ｖ　Ｋ　Ｄ　Ｌ　Ａ　Ｅ　Ａ　Ｄ　Ｆ　Ｇ　ｌ２１　ＣＧＣＣＴＴＧＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＣＧＡＧＡＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴＣＡＴＧＴＣＴＴＧＣＣＧＣＡＣＴＧＡＧ　ｌ　８０　Ｒ　Ｌ　Ｅ　Ｌ　Ｅ　Ｍ　Ａ　Ｅ　Ａ　Ｅ　Ｍ　Ｐ　Ｇ　Ｌ　Ｍ　Ｓ　Ｃ　Ｒ　Ｔ　Ｅ　１８１　ＴＴＣＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＣＡＴＧＡＴＣＡＣＴＧＧＡＴＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＡｃＣＡＴＣ　２４０　Ｆ　Ｇ　Ｐ　Ｓ　Ｑ　Ｐ　Ｌ　Ｋ　Ｇ　Ａ　Ｍ　Ｉ　Ｔ　Ｇ　Ｓ　Ｌ　Ｈ　Ｍ　Ｔ　Ｉ　２４１　ＣＡＧＡＣＣＧＧＴＧＴＣＣＴＴＡＴＴＧＡＧＡＣＴＣＴＧＧＴＴＧＣＣＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＡＧＧＴＣＣＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ　３００　Ｑ　Ｔ　Ｇ　Ｖ　Ｌ　Ｉ　Ｅ　Ｔ　Ｌ　Ｖ　Ａ　Ｌ　Ｇ　Ａ　Ｅ　Ｖ　Ｒ　Ｗ　Ｃ　Ｓ　３０ｌ　ＴＧＣＡＡＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＡＣＴＣＡＧＧＡＣＣＡＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＴＴＧＣＣＣＧＣＧＡＣＧＣＴＴＧ　Ｔ　３６０　Ｃ　Ｎ　Ｉ　Ｆ　Ｓ　Ｔ　Ｑ　Ｄ　Ｈ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ｉ　Ａ　Ｒ　Ｄ　Ａ　Ｃ　Ａ　３６ｌ　ＴＧＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧ　４２０　Ｖ　Ｆ　Ａ　Ｗ　Ｋ　Ｇ　Ｅ　Ｔ　Ｌ　Ｅ　Ｅ　Ｙ　Ｗ　Ｗ　Ｃ　Ｔ　Ｅ　Ｑ　Ａ　Ｌ　４２１　ＡＡＣＴＧＧＣＣＴＧＡＧＧＧＴＡＡＣＧＧＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＴＣＧＴＴＧＡＣＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＧＣｃＡＣＣＣＴＣ　４８０　Ｎ　Ｗ　Ｐ　Ｅ　Ｇ　Ｎ　Ｇ　Ｐ　Ｎ　Ｉ　Ｉ　Ｖ　Ｄ　Ｄ　Ｇ　Ｇ　Ｄ　Ａ　Ｔ　Ｌ　４８ｌ　ＣＴＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＧＧＴＡＡＧＡＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＣＴＧＴＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＣＴＣＴＴＣＣＣＧＡＣ　５４０　Ｌ　Ｉ　Ｈ　Ｅ　Ｇ　Ｋ　Ｋ　Ａ　Ｅ　Ｄ　Ｌ　Ｙ　Ｅ　Ｋ　Ｄ　Ｇ　Ｔ　Ｌ　Ｐ　Ｄ　５４１　ＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＧｃＴＧＡＧＴＴＧ从ＧＡＴＴＧＴＧＣＴＴＡｃＴＡＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡｃＧＧＡＣＴＣ　６００　Ｐ　Ｓ　Ｓ　Ｔ　Ｄ　Ｎ　Ａ　Ｅ　Ｌ　Ｋ　Ｉ　Ｖ　Ｌ　Ｔ　Ｉ　Ｉ　Ｒ　Ｄ　６　Ｌ　６Ｏｌ　ＣＣＣＡＡＧＧＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＧＴＧＧＡＡＣＡＧＧＡＴＧＧＣＣＡＡＧＣＡＣＣＴＧＧＴＣＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧ　６６０　Ｐ　Ｋ　Ｄ　Ｇ　Ｓ　Ｋ　Ｗ　Ｎ　Ｒ　Ｍ　Ａ　Ｋ　Ｈ　Ｌ　Ｖ　Ｇ　Ｖ　Ｓ　Ｅ　Ｅ　６６１　ＡＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧＴＧＴＡＡＡＧＣＧｃＴＴＧＴＡＴＧＡＧＡＴＧＣＡＧＧＣＣＧｃＴＧＧＡＴＣＣＣＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣ　７２０　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｇ　Ｖ　Ｋ　Ｒ　Ｌ　Ｙ　Ｅ　Ｍ　０　Ａ　Ａ　Ｇ　Ｓ　Ｌ　Ｌ　Ｆ　Ｐ　７２ｌ　ＧＣＣＡＴＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＧＡＣＴＣＴＧＴｃＡＣＣＡＡＧＴＣＡＡＡＧＴＴＴＧＡＣＡＡｃＧＴＧＴＡＣＧＧＴＴＧＣＣＧＣ　７８０　Ａ　Ｉ　Ｎ　Ｖ　Ｎ　Ｄ　Ｓ　Ｖ　Ｔ　Ｋ　Ｓ　Ｋ　Ｆ　Ｄ　Ｎ　Ｖ　Ｙ　Ｇ　Ｃ　Ｒ　７８１　ＣＡＣＴＣＣＣＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＴＣＡＴＧｃＧＣＧＣＴＡＣＣＧＡＴＧＴＣＡＴＧＡＴＴＧＣＴＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧｃＣ　８４０　Ｈ　Ｓ　Ｌ　Ｐ　Ｄ　Ｇ　Ｉ　Ｍ　Ｒ　Ａ　Ｔ　Ｄ　Ｖ　Ｍ　Ｉ　Ａ　Ｇ　Ｋ　Ｖ　Ａ　８４ｌ　ＴＴＣＡＴＴＧＣＴＧＧＣＴＡＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＣＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＣ亿Ｃ　Ｔ　９００　Ｆ　Ｉ　Ａ　Ｇ　Ｙ　Ｇ　Ｄ　Ｖ　Ｇ　Ｋ　Ｇ　Ｓ　Ａ　Ｓ　Ａ　Ｌ　Ｋ　Ａ　Ａ　Ｇ　９０ｌ　ＴＧＧＡＧＧＧＴ　９６０　Ａ　Ｒ　Ｖ　Ｉ　Ｉ　Ｇ　Ｅ　Ｉ　Ｄ　Ｐ　Ｉ　Ｃ　Ａ　Ｌ　Ｏ　Ａ　Ａ　Ｍ　Ｅ　Ｇ　９６１　ＴＡＴＧＡＧＡＴＣＧＣＣＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＡＣＴＧＴＧＴＣＡＣｃＴＡＣＡＣＴＧＡＣＡＴｃＴＴＣＡＴｃＡＣｃＡＣＣＡＣＴ　ｌ０２０　Ｙ　Ｅ　Ｉ　Ａ　Ｐ　Ｉ　Ｅ　Ｄ　Ｃ　Ｖ　Ｔ　Ｙ　Ｔ　Ｄ　Ｉ　Ｆ　Ｉ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　１Ｏ２１　ＧＧＣＡＡＣＡＡＧＧＡｃＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＴＧＧＣｃＡＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＡＡＣＧＣｃＡＴＣＧＴＴ　ｌ０８０　Ｇ　Ｎ　Ｋ　Ｄ　Ｉ　Ｉ　Ｍ　Ｖ　Ｄ　Ｈ　Ｍ　Ａ　Ｋ　Ｍ　Ｋ　Ｎ　Ｎ　Ａ　Ｉ　Ｖ　１０８ｌ　ＧＧＡＡＡＣＡＴＡＧＧＡＣＡＴＴＴＣＧＡＴＡＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＣＡＴＧＧＣＴＧＧＴＧＴＧＴＡＣＧＧｃＴＴＣｃＣＴＧＧＡ　ｌ１４０　Ｇ　Ｎ　Ｉ　Ｇ　Ｈ　Ｆ　Ｄ　Ｎ　Ｅ　Ｉ　Ｄ　Ｍ　Ａ　Ｇ　Ｖ　Ｙ　Ｇ　Ｆ　Ｐ　Ｇ　ｌｌ４ｌ　ＡＴＣ从ＧＡＧＧＣＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＡＴＧＧＴ　１２００　Ｉ　Ｋ　Ｒ　０　Ｎ　Ｉ　Ｋ　Ｐ　０　Ｃ　Ｄ　Ｒ　Ｆ　Ｉ　Ｆ　Ｐ　Ｄ　Ｇ　Ｈ　Ｇ　１２０ｌ　ＧＴＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＧｃＣＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡｃＴＴＧＧＧＡＴＧＣＧＣＣＡＣＧＧＧＡＣＡＴＣＣＴＴｃＴ　１２６０　Ｖ　Ｉ　Ｉ　Ｌ　Ａ　Ｅ　Ｇ　Ｒ　Ｌ　Ｌ　Ｎ　Ｌ　Ｇ　Ｃ　Ａ　Ｔ　Ｇ　Ｈ　Ｐ　Ｓ　１２６１　ＴＴＣＧＴＣＡＴＧＴＣＴＴＧＣＴｌＣＡＴＴｃＡＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＴＡＴＣＧＣＣＣＡＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＴＧＧＡＡｃＧＡＧ　１３２０　Ｆ　Ｖ　Ｍ　Ｓ　Ｃ　Ｓ　Ｆ　Ｔ　Ｎ　Ｑ　Ｖ　Ｉ　Ａ　Ｏ　Ｌ　Ｅ　Ｌ　Ｗ　Ｎ　Ｅ　１３２ｌ　ＣＧＣ１℃ＣＡＣＴＧＧＣＣＧＣＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＴＧＣＴＣＯＣＣＡＡＧＣＡＣＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＡＧ　ｌ３８Ｏ　Ｒ　Ｓ　Ｔ　Ｇ　Ｒ　Ｙ　Ｅ　Ｎ　Ｋ　Ｖ　Ｙ　Ｖ　Ｌ　Ｐ　Ｋ　Ｈ　Ｌ　Ｄ　Ｅ　Ｋ　ｌ３８ｌ　ＧＴＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣ盯ｃＴＧＧＡＣＡＡＧＣＴＧＧＧＴＴＧｃＡＡＧｃＴＧＡＣＣＡＡＧｃＴＴＴｃＡＣＣＴＧＡＧＣＡＧ　１４４０　Ｖ　Ａ　Ｔ　Ｌ　Ｈ　Ｌ　Ｄ　Ｋ　Ｌ　Ｇ　Ｃ　Ｋ　Ｌ　Ｔ　Ｋ　Ｌ　Ｓ　Ｐ　Ｅ　０　１４４１　ＧＣＴＧｃＡＴＡＣＡＴＴＡＡＣＧＴＧＣＣＣＡＴＣＧＧＡＧＧＣＣＣＣＴＡｃＡＡＧｃＣＣＧＣｃＡＡＣＴＡＣＣＧＣＴＡＣＴＡＧ　１５００　Ａ　Ａ　Ｙ　Ｉ　Ｎ　Ｖ　Ｐ　Ｉ　Ｇ　Ｇ　Ｐ　Ｙ　Ｋ　Ｐ　Ａ　Ｎ　Ｙ　Ｒ　Ｙ　１５０ｌ　ａｔｇｔｇｃｔｔａｇａｔｇｔａｇｔｃｔａｔａｇｔｔａｇｇｔｔｇｃａｇｇｔｇｃａｔｇｃａａｃｇｔｇａａｇｔｔｇｃｃａａｃｔ　ｌ５６０　ｌ５６ｌ　ｌ６２０　ｌ６２１　ｌ６８０　１６８ｌ　ｔｔｃａｔｃｔｔｔａｇｃａｃｇａｇｃｔｔｇｃａｔｔｃａｔｇｃｔｇｃｇｃｔａｔｃｇｃｇａｃｔｔｔｔｔａｃａｔａｇｔｇｔｔｇ　ｌ７４０　ｌ７４ｌ　ａｇｔｇｔｇｔｔａｔｔａｔｇｔｔｔｔｔｔｔｔａｔｇｇｇｔｔｔｃａａｔｇａｇａｔｔｔｇｇｔｇｇｃａｔｇｔａａｃａａｔｔｃｇ　ｌ８００　ｌ８０１　ｇａａｇｔｔａａａａａａａａａｇａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａａ　１８４４　图１　南极冰藻ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ基因全长ｃＤＮＡ序列及其推导的氨基酸序列　终止子以星号表示，下划线处为ＳＡＨＨ两个标志序列，黑体字母代表Ｎ．糖基化位点，方框内为ＡＵ模体．　Ｆｉｇ．１　Ｆｕｌｌ—ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ　ａｎｄ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｔｈｅ　ｓｔｏｐ　ｃｏｄｏｎ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｂｙ　ａｎ　ａｓｔｅｒｉｓｋ．Ｔｈｅ　ｔｗｏ　ＳＡＨＨ　ｓｉｇｎａｔｕｒｅ　ｍｏｔｉｆｓ　ｗｅｒｅ　ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ．Ｔｈｅ　Ｎ—ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　ｗａｓ　ｂｏｌｄ．Ｔｈｅ　ｌｏｗｅｒ—　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　５　ａｎｄ　３　ＵＴＲ．Ｔｈｅ　ＡＵ　ｍｏｔｉｆｗａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｏｘ．　中国水产科学　第１８卷　标志性序列１（　ＳＣＮＩＦＳＴＱＤＨＡＡＡＡＩ如　）和ＳＡＨＨ　标志性序歹０　２（　ＧＫｖＡＦＩＡＧＹＧＤｖＧＫＧｓＡ　Ｓ２８２）￣　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ理论等电点（ｐＯ为５．１６，尽管与其他　生物ＳＡＨＨ的等电点具有一定差异，但它们都属于　酸性蛋白酶，其催化机理应该是相似的Ｉｌ　。　及一个ＮＡＤ结合位点（　们ＮＶ…Ｔ　Ｇ　）。　２．３　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ基因的同源性及进化分析　所有来源的ＳＡＨＨ均为同源四聚体，每个亚　基含有１分子紧密结合的辅酶（ＮＡＤ　），并由３个　结构域组成：大的Ｎ端底物结合域或催化域、辅　因子结合域或ＮＡＤ结合域和ｃ端域　Ｊ。对　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ蛋白功能域预测分析，也发现该蛋　ＢＬＡＳＴ分析发现ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ与其他物种　ＳＡＨＨ基因具有较高的同源性，其一致性为６２％－　８５％。其中相似性最高的是莱茵衣藻（Ｃｈｌａｍｙｄｏ—　ｍｏｎａｓ　ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）（８５％）（ＸＭ＿００　１　６９３２８７）。将　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ与其他藻类ＳＡＨＨ进行同源比对分　析表明，他们在氨基酸序列上有很高的相似性，　说明ＳＡＨＨ是一种进化上较为保守的蛋白（图２）。　将推导的ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ氨基酸序列与其他藻类、　动植物、微生物等构建系统进化树，结果显示　ＳＡＨＨ家族可明显的被分为动物、植物、藻类、细　菌四大分支，ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ与杜氏盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ　ｓａｌｉｎａ）（ＡＤＪ９６６３５）、莱茵衣藻（ＸＭ　００１６９３２８７）、　小球藻Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ（ＥＦＮ５１２５１）等有较近亲　缘关系（图３）。　２．４　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ基因的亚基结构　将ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ氨基酸序列提交至ＳＷＩＳＳ—ＭＯ．　ＤＥＬ程序，自动搜索同源蛋白作模板，得到　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ单亚基三级结构模型。同源蛋白与目　标蛋白的一致性为６２％，因此该模型可信度较高。　利用ＰｙＭＯＬ　Ｖｉｅｗｅｒ软件分析亚基结构，发现该亚　基共有２０个仅一螺旋和ｌ２个　一折叠，由３个结构域　组成：大的Ｎ端底物结合域（Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ—ｂｉｎｄｉｎｇ）、　ＮＡＤ结合域（ＮＡＤ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｄｏｍａｉｎ）和ｃ端域　（Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａ１）（图４）。　３讨论　本研究通过ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ．ＰＣＲ技术成功　地克隆了南极冰藻ＩＣＥ—Ｌ　Ｓ一腺苷同型半胱氨酸水　解酶全序列。ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ基因全长ｌ　８４４　ｂｐ，编　码４８７个氨基酸。该基因的成功克隆说明其存在　于南极冰藻并进行了表达，与我们立项时的预期　是相符的，它极可能参与了南极冰藻的极端环境　适应性。根据推导的南极冰藻ＳＡＨＨ氨基酸序列，　预测其分子量为５３．０　ｋＤ，文献报道其他生物　ＳＡＨＨ的分子量为４５—５５　ｋＤ　Ｊ，分子量与之相符。　白存在两个ＳＡＨＨ基因标志序列，即ＳＡＨＨ标志　性序列ｌ（髂ＳＣＮＩＦＳＴＱＤＨＡＡＡＡＩ　）和ＳＡＨＨ标　志性序列　２（ｚ６　ＧＫＶＡＦＩＡＧＹＧＤＶＧＫＧｓＡｓ　），　以及１个ＮＡＤ结合位点（　ＮＶ－一ＴＧ　）（图２）。　３Ｄ结构也表明其具有明显的３个重要的结构域　（图４）。因此该蛋白符合ＳＡＨＨ的一般结构域构成，　进一步证实了南极冰藻ＳＡＨＨ基因克隆结果的正　确性。Ｐａｒｋｅｒ［Ｈ］等认为ＮＡＤ结合位点邻近的非　保守区，可能参与酶与辅酶结合的调节，在图２　中也发现南极冰藻ＳＡＨＨ在ＮＡＤ结合位点之前　具有一个显著的非保守区，其是否参与ＳＡＨＨ与　辅酶的调节，有待进一步的探讨。　不同来源的ＳＡＨＨ在进化过程中具有较高的　保守性，但不同的ＳＡＨＨ在氨基酸在序列上也存　在一定的变化［１Ｏ－ｌｌ】。本研究中ＢＬＡＳＴ分析发现，　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ与其他物种ＳＡＨＨ基因具有较高的　同源性，其中与莱茵衣藻的同源性高达８５％；它　们的同源性也如实地表现在相似的空间结构与类　似的结构域上（图４）。与此同时，其氨基酸序列也　不乏变化，如ＮＡＤ结合位点区至少有９个氨基酸　残基与其他ＳＡＨＨ完全不同（图２），这些不同与如　上所述等电点、分子量等参数的差异直接相关。　可见经氨基酸的同源比对分析进一步证实了　ＳＡＨＨ是一个进化上比较保守的蛋白，但ＩＣＥ—　ＬｓＡＨＨ也具有一定的特殊性，这种特殊性可能　与该酶的极端环境适应相关，对南极冰藻在极端　条件下的正常生活非常重要。正因为ＳＡＨＨ的保　守性与特殊性，在构建的系统进化树中，各物种　ＳＡＨＨ分类清晰，符合经典生物学分类结果（图　３）。可见ＳＡＨＨ基因的进化与物种进化是一致性　的，考虑到该基因的保守与特殊两方面的特点，　第６期　王金慧等：南极冰藻Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ　Ｓ－腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析１２４１　望通过原核表达、基因敲除、荧光定量等技术，能　够深入认识ＳＡＨＨ基因及其产物在南极冰藻极端　环境适应过程中的地位与作用，正确分析其甲基　化调节途径。故本研究为从ＳＡＨＨ角度进一步阐　明南极冰藻的极端环境适应机制奠定了基础。　参考文献　［１】Ｔａｎａｋａ　Ｈ，Ｍａｓｕｔａ　Ｃ，Ｋａｔａｏｋａ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｐｌａｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｋ—ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｔａｂａｃｕｍ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅａｒｌｙ　ｆｌｏｗｅｒ　ｂｕｄ　ｆｏｒ—　ｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，１９９６，１１３：１６７－１７４．　［２］　Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｌｉ　Ｙ　Ｊ，Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌ一１－ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００５，７８：１８０—１８６．　［３］Ｔａｎａｋａ　Ｎ，Ｎａｋａｎｉｓｈｉ　Ｍ，Ｋｕｓａｋａｂｅ　ｅｔ　ａ１．Ｃｒｙｓｍｌ　Ｓｔｒｕｃ—　ｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌ・－Ｌ—Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｕ－－　ｍａｎ　ｍａｌａｒｉａ　ｐａｒａｓｉｔｅ　Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，　２００４，３４３：１００７—１０１７．　［４］　Ｋｌｏｏｒ　Ｄ，Ｏｓｓｗａｌｄ　Ｈ．Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ａｓ　ａ　ｔｒａｇｅｔ　ｆｏｒ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｈａｒ—　ｍａｃｏｌ　Ｓｃｉ，２００４，２５：２９４—２９７．　［５５］　佘义斌，朱一超，张天真，等．棉花腺苷高半胱氨酸水解　酶ｃＤＮＡ的克隆、表达及染色体定位［Ｊ］＿作物学报，２００８，　３４（６）：９５８—９６４．　［６］　Ｃｔｍａｃｔａ　Ｆｒｉｔｚｌｅｒ　Ｊ　Ｍ，ｇｕｒｉｎｏｖ￣Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｉｆｃａｃｙ　ｏｆ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｉｈｎｉｂｉｔｏｒｓ，Ｄ・ｅｒｉｔａｄｅｎｉｎｅ　ａｎｄ（Ｓ）一ＤＨＰＡ，ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｐａｒ－　ｒｕｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，２０１０，１２６：１１３—１１６．　［７】　Ｓｔｅｅｒｅ　Ｊ　Ａ，Ｈｏｎｅｋ　Ｊ　Ｆ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｎａｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌ—Ｌ—ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．　Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，２００３，１　１：３２２９—３２３６．　［８］Ｐｏｒｃｅｌｌｉ　Ｍ，Ｆｕｓｃｏ　Ｓ，Ｉｎｉｚｉｏ　ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ，　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔ—　ｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ　ａｒｃｈａｅｏｎ　Ｓｕｒｉｏｌｏｂｕｓ　ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｐｕｒｌｆ，２０００．１８：２７—３５．　［９］　Ｂｅｌｕ￣ｉｄ　Ｒ，Ｃｕｋ　Ｍ，Ｐａｖｋｏｖ　ｅｔ　ａ１．Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌ　ｈｏｍｏｃｙｓｔ－　ｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＡｄｏＨｃｙａｓｅ）ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｉ－　ｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ＡｄｏＨｃｙａｓｅ　ａｒｅ　ｈｉｇｈｌｙ　ｅｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｔｏ　ｃｏｄｏｎ　８９　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，２００８，３６８：３０—３６．　［１　０］Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ　Ｌ　Ｂｒｚｅｚｉｉｆｓｋｉｃ　Ｋ，Ｌｅｇｏｃｋｉａ　Ａ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｂａｙｅｓ－　ｉａｎ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｖｅａｌｓ　ｔｗｏ—ｄｏｍａｉｎ　ｔｏｐｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．　Ｍｏｌ　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔ　Ｅｖｏｌ，２００５，３４：１５—２８．　［１１］Ｔｕｒｎｅｒ　Ｍ　Ａ，Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｄ，Ｙｉｎ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｎａｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｅｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　ＢｉｏＰｈｙｓ，２０００，３３：１０１－１２５．　（１２】Ｐｏｒｃｅｌｌｉ　Ｍ，Ｃａｃｃｉａｐｕｏｔｉ　Ｇ，Ｆｕｓｃｏ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅ—　ｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｃｏｄｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｉｎ　ｈｔｅ　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ　ｒａｃｈａｅｏｎ　Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ　ｓｏｌｆａｔａｒ＃　ｃｕｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，１９９６，１７７：１７—２２．　［１３］Ｔｅｈｌｉｖｅｔｓ　Ｏ，Ｈａｓｓｌａｃｈｅｒ　Ｍ，Ｋｏｈｌｗｅｉｎ　Ｓ　Ｄ．Ｓ－Ａｄｅｎｏｓｙｌ—Ｌ—ｈ—　ｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｉｎ　ｙｅａｓｔ：ｋｅｙ　ｅｎｚｙｍｅ　ｏｆ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｎｄ　ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ，２００４，５７７：５０１—５０６．　［１４］Ｐａｒｋｅｒ　Ｎ　Ｂ，Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｄ，Ｈａｎｋｅ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ　ｃｒｕｚｉ：　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌ　ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ［Ｊ］．　Ｅｘｐ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，２００３，１０５：　１４９－１５８．　［１５］Ｓｈａｒｍａ　Ｎ，Ｃｒａｍ　Ｄ，Ｈｕｅｂｅｒｔｔ　ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｌｏｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　ｃｒｕｃｉｆｅｒ　Ｔｈｌａｓｐｉ　ａｒｖｅｎｓｅ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ａｎｄ　ｎｏｖｅｌ　ｇｅｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ａ　ｐｌａｎｔ’ｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｃｏｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．　Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００７，６３：１７１－１８４．　［１６］孙晓红，冯爱萍，陈明杰，等．草菇冷诱导相关基因的克　隆及序列分析［Ｊ］．菌物学报，２００６，２５（１）：８８－９３．　［１７］汪虹，陈明杰，冯爱萍，等．草菇ｓ一腺苷一Ｌ一高半胱氨酸水　解酶同源基因Ｃｏｒ３低温条件下的表达变化［Ｊ］．食用菌学　报，２０１０，ｌ７（１）：１４－１６．　［１８］Ｍａｓｕｔａ　Ｃ，Ｔａｎａｋａ　Ｈ，Ｕｅｈａｒａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｂｒｏａｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｐｌａｎｔ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔｓ　ｃｏｎｆｅｒｒｅｄ　ｂｙ　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｉｎ—　ｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｏｓｔ　ｇｅｎｅ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ－－ｄ－－　ｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｔｒｎａｓｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９９５，９２：６ｌ１７—６１２１．　［１９］Ｄｉｎｇ　Ｍｉａｏ　Ｊ　Ｌ，Ｗａｎｇ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｄ　ｏｎ　ＧＳＨ　ａｎｄ　ＧＳＨ—ｒｅｌａｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ　ｅｘ—　ｉｓｔｉｎｇ　ｉｎ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｓｃｉ，２００５，１７（４）：　６６７－６７１．　［２０］Ｄｉｎｇ　Ｍｉａｏ　Ｊ，Ｗａｎｇ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｉｃ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｆｒｏｍ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｉｃｅ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．Ｓｔｒａｉｎ　ＩＣＥ—Ｌ［Ｊ］＿Ｐｏｌａｒ　Ｂｉｏｌ，２００７，３　１：２３—３０．　【２１］Ｐｒｏｖａｓｏｌｉ　Ｌ．Ｍｅｄｉａ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｏｆｒ　ｈｔｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａ—　ｉｆｎｅ　ａｌｇａｅ．Ｉｎ：Ｗａｔａｎａｂｅ　Ａ，ＨａＲｏｒｉ　Ｒ（ｅｄｓ）Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｃｏｌｌｅｃ—　ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｌｇａｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　ＵＳ－Ｊａｐａｎ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　Ｈａｋｏｎｅ　Ｊａ—　ｐａｎ，１９６８：６３—９５．　［２２］ＷｕＣＬ，ＭａｉＫ　Ｓ，ＺｈａｎｇＷＢ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌｒａ　ｃｌｏｎｉｎｇ，ｃｈａｒ—　ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａｂａｌｏｎｅ　Ｈａｌｉｏｔｉｓ　ｄｉｓｃｕｓ　ｈａｎｎａｉ　Ｉｎｏ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｓｅｌｅｎｉｍｕ，ｚｉｎｃ　ａｎｄ　ｎ［Ｊ］．Ｃｏｍ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，Ｐａｒｔ　Ｃ，２０１０，１５２：１２１—１３２．　［２３］Ｓｃｈｗｅｄｅ　Ｌ　Ｋｏｐｐ　Ｊ，Ｇｕｅｘ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．ＳＷＩＳＳ—ＭＯＤＥＬ：ａｎ　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ－ｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｓｅｖｒｅｒ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ，２００３，３１：３３８１—３３８５．　［２４］Ｈｒｙｃｙｎａ　Ｃ　Ａ　ａｎｄ　Ｃｌａｒｋｅ　Ｓ．Ｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｓｉｇ—　ｎａｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｂｙ　Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ，１９９３，５９：２８１－３００．　１２４２　中国水产科学　第１８卷　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌ　ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＳＡＨＨ）ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｉｃｅ　ａｌｇａ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ－Ｌ　（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ，Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）　ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｈｕｉ，ＤＩＮＧ　Ｙｕ，ＪＩＡＮ　Ｊｉｃｈａｎｇ，ＷＵ　Ｚａｏｈｅ　Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｅｐｉｄｅｍｉ—　ｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　Ａｑｕａｔｉｃ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃ　Ａｎｉｍａｌｓ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２４０２５，Ｃｈｉｎａ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓ—Ａｄｅｎｏｓｙｌ—Ｌ．ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（ＳＡＭ）ｉｓ　ｍｅ　ｍｏｓｔ　ｃｏｍｍｏｎ　ｍｅｔｈｙｌ　ｄｏｎｏｒ　ｉｎ　ａ　ｍｕｌｔｉｔｕｄｅ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍｅｔｈｙｌａ—　ｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．Ｎｕｍｅｒｏｕｓ　ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｙｌ　ｇｒｏｕｐ　ｆｒｏｍ　ＳＡＭ　ｔｏ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｃｅｐｔｏｒｓ．ｆｏｒｍｉｎｇ　Ｓ．ａｄｅｎｏｓｙ１．Ｌ—ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＳＡＨ）．ＳＡＨ　ｉｓ　ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　ｔｏ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ａｎｄ　Ｌ．ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｂｙ　Ｓ—ａｄｅｎｏｓｙｌ—Ｌ．ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＳＡＨＨ，ＥＣ　３．３．１．１１．ＳＡＨＨ　ｉｓ　ａｎ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ａｌｌ　ｌｉｖｉｎｇ　ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ　ａｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｄｒｕｇ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒ　ｍａｎｙ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｐａｒａｓｉｔｅｓ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＡＨＨ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｃａｎ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＡＨ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　Ｓ．ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（ＳＡＭ）：ＳＡＨ　ｒａｔｉｏ　ｉｎ　ｃｅｌｌｓ．Ｉｎ　ｔｈａｔ　ｃａｓｅ．　ＳＡＨＨ　ｃａｎ　ａｃｔ　ａｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔ　ｆｅｅｄｂａｃｋ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ＳＡＭ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａ　ｗｉｄｅ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ．ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｓｍａｌｌ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＳＡＨＨ　ｉｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ａｎｉｍａｌｓ．ｐｌａｎｔｓ　ｆｕｎｇｉ．ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｉｃｅ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ　ｗｉｔｈ　ｓｐｅｃｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｔｏ　ｗｉｔｈｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒｅｍｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ｂｙ　ｌｏｗ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｉｃｅ．ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｏｘｙｇｅｎ．ａｎｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ｓｅａｓｏｎａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｌｉｇｈｔ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｉｎ　ｒｅｃｅｎｔ　ｙｅａｒｓ．　Ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｂｙ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｓｅａ　ｉｃｅ　ａｌｇａ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．Ｌ　ｒｅｓｐｏｎｄｓ　ｔｏ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｆａｃｔｏｒｓ．ｗｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｉｔｓ　ＳＡＨＨ．Ａ　ｃＤＮＡ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　Ｓ．ａｄｅｎｏｓｙｌ　ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅｆｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ａｓ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ）ｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ａｌｇａ　ｂｙ　Ｉｔ　ｒ．ＰＣＲ　ａｎｄ　ＲＡＣＥ．ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ　ＩＣＥ　ＬＳＡＨＨ　ｆｕ１１．１ｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　１　８４４　ｂｐ．ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ａ　５　．ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｕｎｔｒａｎｓ—　ｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ（ＵＴＲ）ｏｆ　３６　ｂｐ，ａ　３　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ＵＴＲ　ｏｆ　３４４　ｂｐ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐｏｌｙ（Ａ）ｔａｉｌ，ａｎｄ　ａｎ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｏｆ　１４６１　ｂｐ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　４８７　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ（ＭＷ）ｏｆ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ｗａｓ　５３　ｋＤ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｅｓｔｉｍａｔｅｄ　ｐＩ　Ｏｆ　５．１６．Ｕｓｉｎｇ　ＳｉｇｎａｌＰ　３．０　ａｎｄ　ＴＭＨＭＭ　Ｓｅｒｖｅｒ　ｖ．２．０　ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｉｔ　ｗａｓ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＣＥ—ＬＳＡＨＨ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｃｏｎｔａｉｎ　ａ　ｓｉｇｎａｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｒ　ａ　ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ　ｒｅｇｉｏｎ．ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｉｔ　ｉｓ　ｎｏｔ　ａ　ｓｅｃ—　ｒｅｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｍｏｎｇ　ＳＡＨＨ　ｅｎｚｙｍｅｓ．ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＣｌｕｓｔａｌＸ　２．０　ａｎｄ　Ｍｅｇａ　５．０　ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈｉｎｇ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｂｏｏｔ—　ｓｔｒａｐ　ｒｅ－ｓａｍｐｌｉｎｇ（１　０００　ｐｓｅｕｄｏ—ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ）．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ．ｍｅｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＳＡＨＨ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｏｒｍｅｄ　ｃｌｅａｒ　ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔｓ，ａｎｉｍａｌｓ，ａｌｇａｅ，ａｎｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ｅｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐａｒａｌｌｅｌ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ　ｓａｌｉｎａ，Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ，ａｎｄ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＢＬＡＳＴ　ａｌｇｏｒｉｔｈｍ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ｇｅｎｅ　ｓｈａｒｅｄ　６２％－８５％ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ＳＡＨＨｓ．Ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｗａｓ　８５％ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＳＡＨＨ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ｃ．ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ．Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｂｅ—　ｔｗｅｅｎ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ＳＡＨＨｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｈｉｇｈ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ＳＡＨＨｓ．Ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ．ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ＩＣＥ—ＬＧＰｘ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＳＷＩＳＳ．ＭＯＤＥＬ　ｗｏｒｋ—　ｓｐａｃｅ　ａｎｄ　ＰｖＭ０Ｌ　Ｖｉｅｗｅｒ　ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅ　３Ｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｏｄｅｌ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＣＥ．ＬＳＡＨＨ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｈａｓ　１　２　Ｂ．ｓｈｅｅｔｓ　ａｎｄ　２０　．ｈｅｌｉｃｅｓ，ａｎｄ　ｃｏｎｓｉｓｔｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｄｏｍａｉｎｓ：ａ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｄｏｍａｉｎ，ａｎ　ＮＡＤ．ｂｉｎｄｉｎｇ　ｄｏｍａｉｎ，　ａｎｄ　ａ　Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｄｏｍａｉｎ．Ｉｎ　ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ．ＳＡＨＨ　ｉｓ　ａ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｈａｔ　ｉｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｃｅ　ａｌｇａ　Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＩＣＥ—Ｌ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．；ＩＣＥ—Ｌ；Ｓ—Ａｄｅｎｏｓｙｌ　ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；３Ｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｏｄｅｌｉｎｇ；　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＤＩＮＧ　Ｙｕ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｙｕ＠ｇｄｏｕ．ｅｄｕ．ｃｎ