（）文章编号：１００５－９８７３２０１３０４－０００１－０５
基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的八株灰树花
栽培菌株遗传多样性分析
王春晖，尹永刚＊，胡汝晓，彭运祥
（）湖南省食用菌研究所，湖南长沙４１００１３
摘 要：育种亲本的选择一般以所选亲本亲缘关系的远近为基础，本研究采用ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ分子标记技术对８株灰树花（栽培菌株进行遗传多样性分析。１Ｇｒｉｏｌａｒｏｎｄｏｓａ） ６个ＩＳＳＲ引物共扩增出２１４条位点片段，ｆｆ其中多态性片段１占总片段条数的９菌株间相似系数变化范围为０．在相似系数为９６条，１．６％，２６４９～０．８７７２，其中多态性片段２多态性０．４８８处将８个菌株分为４大类；１９个ＲＡＰＤ引物共扩增出２６５条位点片段，３８条，相似系数变化范围为０．在相似系数为０．比率为８９．８％，３３８２～０．８５８２，４４２处将８个菌株分为４大类。同时将ＲＡ亲缘关系树状图在分子水平上显示了供试菌株之间的亲缘关系，ＰＤ与ＩＳＳＲ扩增结果进行综合性分析，为今后灰树花的遗传多样性研究及遗传育种亲本的选配提供了理论依据。关键词：灰树花；分子标记；亲缘关系；多态性
又称栗蘑、千佛Ｇｒｉｏｌａｒｏｎｄｏｓａ） 灰树花（ ｆｆ菌、贝叶多孔菌、舞茸，野生灰树花大多发生在板栎树、栲树等壳斗科树种及阔叶树树桩基部栗、
或倒腐的近地树干上，以分解树木的心材为营
１］
，造成树木心材腐朽，是一种典型的白腐菌［养，
术，基于ＩＳＳＲ的聚类分析能有效地反映杂交子
６，７］
，代的遗传分化［在食用真菌领域常用于物种
遗传分类、亲缘关系及遗传多样性等研究。鉴定、
本研究将采用ＩＳＳＲ标记、ＲＡＰＤ标记以及两者相结合的方法分别对８个灰树花栽培菌株进行遗传关系分析，揭示其中遗传多样性，为灰树花种质资源的遗传多样性和灰树花育种亲本选配研究提供科学依据。
同时也是一种珍稀的大型食药用真菌，子实体味道鲜美，柔软脆嫩，富含蛋白质、纤维、维生素，深
２］
，受人们喜爱［在药用价值上具有抗肿瘤、免疫
抗血栓、抗菌、抗病毒及抗氧化等多重功刺激、
３］
。目前国内外关于灰树花的研究报道主要效［
１ 材料与方法１．１供试菌株
供试栽培菌株编号及来源见表１。
１．２菌丝体培养和基因组ＤＮＡ提取
０小块菌丝体接种于ＰＤＢ液体 供试菌株取１培养基（２００ｇ去皮马铃薯，２０ｇ葡萄糖，１Ｌ水，／中，２５℃恒温条件下１３０ｒｍｉｎ振荡培Ｈ自然）ｐ
。菌丝体基因组Ｄ养１０ｄＮＡ采用ＤＮｅａｓＭｉｎｉｙ （德国）试剂盒ＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔＱｉａｅｎ，Ｐｌａｎｔ ｇ
法提取。
１．３引物与ＰＣＲ扩增
由上ＡＰＤ和ＩＳＳＲ引物信息见表２， 所用Ｒ
海生工生物工程有限公司合成。
集中在栽培技术和生物活性物质成分与功能研
３，４］
等方面，而关于该物种的分子生物学研究究［
报道较少。
随机扩增多态性（Ｒａｎｄｏｍｍｌｉｆｉｅｄ ａｐｏｌｍｏｒｈｉｃＤＮＡ，ＲＡＰＤ）技术是１９９０年由 ｐｙｐ
［］
ＷＩＬＬＩＡＭＳ首先报道的一种分子标记技术５，具有多态性高、操作简单、直观可靠、ＤＮＡ用量少、随机引物没有严格的种属界限等优点，已被广泛应用于遗传图谱的构建、遗传多样性分析、种间亲缘关系的确定等领域。简单序列重复区，间多态性（ＩｎｔｅｒｓｉｍｌｅｓｅｕｅｎｃｅｒｅｅａｔＩＳＳＲ）－ ｐｑｐ是一种基于基因组简单重复序列的ＤＮＡ标记技
收稿日期：２０１３－０４－０９原稿；２０１３－０６－０７修改稿
）基金项目：湖南省科技计划项目（编号：的部分研究内容２０１１ＮＫ２００７
，作者简介：王春晖（男，硕士，副研究员，主要从事食用菌遗传育种研究。１９６５－）１９９４年毕业于湖南师范大学，
＊
：本文通讯作者 Ｅ－ｍａｉｌｉｎｏｎａｎ０７２１＠１２６．ｃｏｍｙｙｇｇｇ
２
食 用 菌 学 报表１ 供试灰树花菌株
Ｔａｂｌｅ１ Ｇｒｉｏｌａｒｏｎｄｏｓａｔｅｓｔｓｔｒａｉｎｓ ｆｆ第２０卷
序号ＣｏｄｅＧｆ１－２Ｇｆ－Ｇｆ３－Ｇｆ４－Ｇｆ５－Ｇｆ６－Ｇｆ７－８Ｇｆ－菌株名称Ｓｔｒａｉｎ
灰树花－１Ｈｕｉｓｈｕｈｕａ１－灰树花－４Ｈｕｉｓｈｕｈｕａ４－灰树花１号ＨｕｉｓｈｕｈｕａＮｏ．１ 灰树花５号ＨｕｉｓｈｕｈｕａＮｏ．５ 灰树花５３号ＨｕｉｓｈｕｈｕａＮｏ．５３ 灰树花１５１Ｈｕｉｓｈｕｈｕａ１５１ 灰树花Ｈｕｉｓｈｕｈｕａ
灰树花３号ＨｕｉｓｈｕｈｕａＮｏ．３
三明真菌研究所（福建）北京市农林科学院
来源Ｓｏｕｒｃｅ
ＢｅｉｉｎＡｃａｄｅｍｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒＳｃｉｅｎｃｅ ｊｇｙｇｙ
）ＳａｎｍｉｎＭｃｏｌｏｉｃａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｕｉａｎ ｇｙｇｊ
浙江省农业科学院ＺｈｅｉａｎＡｃａｄｅｍｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ ｊｇｙｇ 湖南省食用菌研究所ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｕｎａｎＥｄｉｂｌｅＦｕｎｉ ｇ三明真菌研究所（福建）
）ＳａｎｍｉｎＭｃｏｌｏｉｃａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｕｉａｎ ｇｙｇｊ
表２ ＩＳＳＲ与ＲＡＰＤ引物Ｔａｂｌｅ２ ＩＳＳＲａｎｄＲＡＰＤｒｉｍｅｒｓ ｐＩＳＳＲ 引物序列引物ＲＡＰＤ序列类图。
２ 结果与分析２．１ＩＳＳＲ分析
ＮＡ进行ＩＳＳＲ 对８株灰树花的基因组Ｄ－ＰＣＲ的统计分析，１６个引物共扩增出２１４条位点片段，其中多态性片段１占总片段条数９６条，多态性整体较高。每个引物扩增条的９１．６％，带数在１其中引物Ｕ０～２１条之间，ＢＣ８２５扩增带数最多，为２引物Ｕ１条，ＢＣ８１２、ＵＢＣ８１６、均为１ＵＢＣ８７６、ＵＢＣ８８０扩增带数最低，０条。获得多态性百分比最高的引物为ＵＢＣ８０７、均获得ＵＢＣ８１１、ＵＢＣ８２５、ＵＢＣ８３４和ＵＢＣ８８０，
而引物Ｕ１００％的多态性片段，ＢＣ８１６、ＵＢＣ８３６扩增得到的多态性片段比例最低，为８０．０％。图１为引物ＵＢＣ８２７对８株灰树花菌株的扩增
图谱。
’’）Ｐ’’）ＰｒｉｍｅｒＳｅｕｅｎｃｅ（５３ｒｉｍｅｒＳｅｕｅｎｃｅ（５３－－ｑｑ（ＡＧ）ＧＴＳ２２ＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧＵＢＣ８０７ ６ＡＵＢＣ８０８ＵＢＣ８１０ＵＢＣ８１１ＵＢＣ８１２ＵＢＣ８１６ＵＢＣ８２５ＵＢＣ８２６ＵＢＣ８２７ＵＢＣ８３４ＵＢＣ８３５ＵＢＣ８３６ＵＢＣ８４０ＵＢＣ８７３ＵＢＣ８８０（ＡＧ） ７Ｃ（ＧＡ） ７Ｔ（ＧＡ） ７Ｃ（ＧＡ） ７Ａ（ＣＡ） ７Ｔ（ＡＣ） ７Ｔ（ＡＣ） ７Ｃ（ＡＣ） ７Ｇ（ＡＧ）Ｔ ７Ｙ（ＡＧ）Ｃ ７Ｙ（ＡＧ）Ａ ７Ｙ（ＧＡ）Ｔ ７Ｙ（ＧＡＣＡ）３（ＧＧＡＧＡ）３Ｓ２４Ｓ２７Ｓ２８Ｓ３６Ｓ３９Ｓ４３Ｓ６４Ｓ７５Ｓ７８Ｓ７９Ｓ１２６Ｓ１５９Ｓ２４２Ｓ４８４Ｓ４８５ＡＡＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＡＡＣＧＧＧＴＧＧＴＧＡＣＧＴＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＡＣＡＡＡＣＧＴＣＧＧＧＴＣＧＣＣＧＴＣＡＣＣＧＣＡＴＣＴＡＣＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＴＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣＧＧＡＣＧＧＣＧＴＡＴＧＣＴＧＡＧＧＴＣＴＣＧＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＧＴＧＣＧＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＴＴＧＧＡＴＡ）ＧＡＣＡ）ＵＢＣ８７６（３７０２（２ＳＳ２０５６ＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＳ２０５９ＡＣＡＡＧＣＧＣＧＡＰＤ－ＰＣＲ与ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增体系参照 ＲＡ
［０］
方法实施。ＰＷＡＮＧ等１ＣＲ产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后拍照记录。１．４数据分析
有带的记为１，无带的 在原始数据的基础上，
／记为０，用Ｅｘｃｅｌ软件将原始数据转换成０１矩阵；用ＮＴ对原ＳＹＳｃ２．１０软件进行数据分析， ｐ始矩阵用ＳＩＭＱＵＡＬ程序求得Ｊａｃｃａｒｄ相似系数，用ＳＨＡＮ程序中的ＵＰＧＭＡ方法进行聚类
分析，并通过ＴｒｅｅＰｌｏｔ模块生成亲缘关系聚
；泳道Ｍ：泳道１～８：菌株Ｇ１ｋｂＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒｓｆ１、Ｇｆ２、Ｇｆｌｕｓ －－－ｐ
３、Ｇｆ４、Ｇｆ５、Ｇｆ６、Ｇｆ７和Ｇｆ８－－－－－：；ＬａｎｅｓＭ，１ｋｂｌｕｓＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒｓ１８：ｓｔｒａｉｎｓＧｆ１，Ｇｆ２，Ｇｆ － －－－ｐ
，３，Ｇｆ４，Ｇｆ５，Ｇｆ６，Ｇｆ７ａｎｄＧｆ８ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ－－－－ －ｐｙ
图１ 引物ＵＢＣ８２７对８株灰树花的扩增图谱Ｆｉ．１ ＩＳＳＲａｔｔｅｒｎｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍＧ．ｒｏｎｄｏｓａｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｆｇｐ
ｒｉｍｅｒｕｓｉｎＵＢＣ８２７ ｐｇ
第４期王春晖，等：基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的八株灰树花栽培菌株遗传多样性分析
３
ａｃｃａｒｄ相似系 ８株供试灰树花菌株之间的Ｊ
数变化范围为０．其中Ｇ２６４９～０．８７７２，ｆ６和Ｇｆ－－７相似系数最高，Ｇｆ２和Ｇｆ４相似系数最低。－－构建的ＩＳＳＲ聚类图见图２。在相似系数为０．４８８处取一结合线，第一小８个菌株被分为４个小组，组：第二小组：Ｇｆ１、Ｇｆ３；Ｇｆ２、Ｇｆ６、Ｇｆ７、Ｇｆ－－－－－－８；Ｇｆ５和Ｇｆ４分别单独为第三和第四小组。－－ａｃｃａｒｄ相似系数变 ８株灰树花菌株之间的Ｊ
化范围为０．其中Ｇ３３８２～０．８５８２，ｆ７和Ｇｆ８相－－似系数最高，Ｇｆ１和Ｇｆ５相似系数最低。构建－－在相似系数为的灰树花菌株ＲＡＰＤ聚类图显示，供试８个菌株被分为４个小组，第一小０．４４２处，组：Ｇｆ１、Ｇｆ２、Ｇｆ６、Ｇｆ７和Ｇｆ８；Ｇｆ３、Ｇｆ４和－－－－－－－。第三和第四小组（图４）Ｇｆ５分别单独为第二、－其中第一小组在相似系数０．４６６处可分为两类，第一类为Ｇ第二类为Ｇｆ１、Ｇｆ２，ｆ６、Ｇｆ７和－－－－Ｇｆ８。－图２ 灰树花菌株的ＩＳＳＲ聚类图
Ｆｉ．２ｅｎｄｒｏｒａｍｂａｓｅｄｏｎＩＳＳＲａｎａｌｓｉｓｏｆＧ．ｒｏｎｄｏｓａ Ｄ ｆｇｇｙ
ｏｉｎｉｎｃｕｌｔｉｖａｒｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｎｅｉｈｂｏｒｍｅｔｈｏｄ －ｇｇｊｇ
２．２ＲＡＰＤ分析
ＮＡ进行ＲＡＰＤ 对８株灰树花的基因组Ｄ－ＰＣＲ的统计分析，１９个引物共扩增出２６５条位点片段，其中多态性片段２占总片段条数的３８条，多态性整体较高。每个引物扩增条带数８９．８％，在８～２其中引物Ｓ为０条之间，２２扩增带数最多，引物Ｓ为８条。获得２０条，２０５６扩增带数最低，多态性百分比最高的引物为Ｓ均获２７、Ｓ６４、Ｓ２４２，得１而引物Ｓ００％的多态性片段，３６、Ｓ２０５６扩增得到的多态性片段比例最低，为７５．０％。图３为引物Ｓ３６对８株灰树花菌株的扩增图谱。
图４ 灰树花菌株的ＲＡＰＤ聚类图
Ｆｉ．４ ＤｅｎｄｒｏｒａｍｂａｓｅｄｏｎＲＡＰＤａｎａｌｓｉｓｏｆ ｇｇｙ
ｏｉｎｉｎｒｏｎｄｏｓａｃＧ．ｕｌｔｉｖａｒｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｎｅｉｈｂｏｒｍｅｔｈｏｄ －ｆｊｇｇｇ
２．３综合分析
ＳＳＲ和ＲＡＰＤ扩增条带的统计数据进 综合Ｉ
行相似系数计算和ＵＰＧＭＡ聚类分析。结果表明，８株灰树花菌株之间的Ｊａｃｃａｒｄ相似系数变化范围为０．其中Ｇ３２１０～０．８４７７，ｆ７和Ｇｆ８相似－－亲缘关系最近，系数最高，Ｇｆ４和Ｇｆ８遗传关系－－最远。８株灰树花菌株的Ｕ图５）ＰＧＭＡ聚类图（显示，在相似系数为０．供试８个菌株被分４６０处，为４个小组：Ｇｆ１、Ｇｆ３为第一小组；Ｇｆ２、Ｇｆ６、－－－－Ｇｆ７和Ｇｆ８为第二小组；Ｇｆ４和Ｇｆ５分别单独－－－－泳道Ｍ，１～８同图１
ＬａｎｅｄｅｓｉｎａｔｉｏｎｓａｓｉｎＦｉ１ ｇｇ
图３ 引物Ｓ３６对８株灰树花的扩增图谱Ｆｉ．３ＡＰＤｆｉｎｅｒｒｉｎｔｓｏｆＧ．ｒｏｎｄｏｓａｃｕｌｔｉｖａｒｓ Ｒ ｆｇｇｐ
ｅｎｅｒａｔｅｄｂｒｉｍｅｒＳ３６ ｇｙｐ
／图５ 灰树花菌株的ＩＳＳＲＲＡＰＤ综合聚类图
／Ｆｉ．５ ＤｅｎｄｒｏｒａｍｂａｓｅｄｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄＩＳＳＲＲＡＰＤ ｇｇ
ａｎａｌｓｉｓｏｆＧ．ｒｏｎｄｏｓａｃｕｌｔｉｖａｒｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｙ
ｕｓｉｎｎｅｉｈｂｏｒｏｉｎｉｎｍｅｔｈｏｄ－ｇｇｊｇ
４
食 用 菌 学 报第２０卷
为第三和第四小组。其中第二小组在相似系数第一类为Ｇ第二类为０．４７０处可分为两类，ｆ２，－Ｇｆ６、Ｇｆ７和Ｇｆ８。－－－比较分别基于ＩＳＳＲ分子标记、ＲＡＰＤ分子标／记以及综合ＩＳＳＲＲＡＰＤ分子标记分析结果发现，、共同之处是Ｇｆ６Ｇｆ７和Ｇｆ８的亲缘关系最近，－－－表明３个菌株可能最初来源于同一地区；而Ｇｆ４－和Ｇ且亲缘关系较远。ｆ５均各自被归为一类，－［３］ＧＲＥＧＯＲＩＡ，ＳＶＡＧＥＬＪＭ，ＢＥＲＯＶＩＣ Ｍ，ｅｔａｌ．
Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｎｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｓｓｅｓｓｍｅｎｔｆｒｉｏｌａ ａ ｂ ｏ Ｇｙｆ ａ
ｒｏｎｄｏｓａｒｅｓｓｆｒｕｉｔｉｎｏｄｉｅｓｎｌｉｖｅｉｌａｋｅｓ ｏ ｏ ｏ ｐ ｃｇｆ ｂ
［］，，（）：Ｊ．ＮｅｗＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００９２６５２６０２６２．ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ －［，４］ＣＨＥＮ ＧＴ，ＭＡ ＸＭ，ＬＩＵＳＴ，ｅｔａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｎｄ ａ ｐ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｏｆ
］ｆｒｏｍＧｒｉｏｌａＪ．Ｃａｒｂｏｈｄｏｌｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｒｏｎｄｏｓａ［ ｙｐｙｆｆ２０１２，８９：６１６６．Ｐｏｌｍ，－ｙ
［］Ｗ５ＩＬＬＩＡＭＳＪＧＫ．ＤＮＡｏｌｍｏｒｈｉｓｍｓａｍｌｉｆｉｅｄｂ ｐｙｐｐｙ
ａｒｅｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃｒｉｍｅｒｓｅｎｅｔｉｃａｒｂｉｔｒａｒ ｐｇｙ ，ＡｃｉｄｓＲｅｓ１９９０，１８：６５３１６５３５． －［６］ＫＯＪＩＭＡ Ｔ，ＮＡＧＡＯＫＡ Ｔ，ＮＯＤＡ Ｋ，ｅｔａｌ．
ｌｉｎｋａｅｍａｏｆＩＳＳＲａｎｄＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃ ｇｐ ｗｈｅａｔｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｔｈａｔｏｆＲＦＬＰｍａｒｋｅｒｓＥｉｎｋｏｒｎ ［］，（）：Ｊ．ＴｈｅｏｒＡｌＧｅｎｅｔ１９９８，９６１５８６４． －ｐｐ［７］ＱＩＡＮ Ｗ，ＧＥＳ，ＨＯＮＧＤＹ．Ｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎ
ｏｕｌａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎａｎｄａｍｏｎｏｆａｗｉｌｄｒｉｃｅＯｒｚａ ｐｐｇｙ
３ 讨论是 灰树花具有独特的食用价值与药用价值，
近年来被越来越多的消费者喜爱的珍稀食用菌品因此，对于该品种分子遗传学及育种方面的研种，
是今后工作的重点。近年来，越来越多的研究究，
者将分子标记技术应用于食用真菌，
［］ＭＡＨＭＵＤＵＬ等８利用ＩＳＳＲ方法成功鉴定分离的双孢蘑菇（同核体与异核Ａａｒｉｃｕｓｂｉｓｏｒｕｓ） ｇｐ［］体菌株。ＲＯ等９利用ＲＡＰＤ技术将２２个刺芹
ｒａｎｕｌａｔａｆｒｏｍＣｈｉｎａｄｅｔｅｃｔｅｄｂＲＡＰＤａｎｄＩＳＳＲ ｙｇ
［］，Ｊ．ＴｈｅｏｒＡｌＧｅｎｅｔ２００１，１０２：４４０４４９．ｍａｒｋｅｒｓ －ｐｐ［８］ＭＡＨＭＵＤＵＬＩＮ，ＢＩＡＮ ＹＢ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ
ｈｏｍｏｋａｒｏｎｓａｎｄｈｅｔｅｒｏｋａｒｏｎｓｏｆＡａｒｉｃｕｓｂｉｓｏｒｕｓ ｙｙｇｐｗｉｔｈｎｔｅｒｓｉｍｌｅｅｕｅｎｃｅｅｅａｔａｒｋｅｒｓ［Ｊ］． ｉ－ ｓ ｒ ｍｐｑｐ，Ｒｅｓ２０１１，１６６：２２６２３６．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ －［９］ＲＯ ＨＳ，ＫＩＭ ＳＳ，ＲＹＵＪＳ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍａｒａｔｉｖｅ ｐ
ｏｎｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｏｆｔｈｅｅｄｉｂｌｅｍｕｓｈｒｏｏｍｓｔｕｄｉｅｓ ｙ ，ＲＰｌｅｕｒｏｔｕｓｅｒｎｉｉ：ＩＴＳｓｅｕｅｎｃｅａｎａｌｓｉｓＡＰＤ ｑｙｙｇ，ｆｉｎｅｒｒｉｎｔｉｎａｎｄｈｓｉｏｌｏｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］． ｇｐｇｐｙｇ，（）：Ｒｅｓ２００７，１１１６７１０７１５．Ｍｃｏｌ －ｙ
［］ＷＡＮＧ１０ＳＸ，ＹＩＮ ＹＧ，ＬＩＵ Ｙ，ｅｔａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ
ｄｉｖｅｒｓｉｔａｍｏｎＣｈｉｎｅｓｅＰｌｅｕｒｏｔｕｓｅｒｎｉｉｅｎｅｔｉｃ ｙｇｇｙｇ ／［］ｃｕｌｔｉｖａｒｓｂｃｏｍｂｉｎｅｄＲＡＰＤＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒＪ．Ｃｕｒｒ ｙ ，（）：Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ２０１２，６５４４２４４３１．－［］１１ＺＨＡＮＧ ＱＳ，ＸＵＢＬ，ＬＩＵＬＤ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｓｉｓｏｆ ｙ
ｅｎｅｔｉｃｉｖｅｒｓｉｔｍｏｎｈｉｎｅｓｅｌｅｕｒｏｔｕｓ ｄ Ｐｇｙｇ ａ Ｃ
侧耳（分为五大类。ＷＡＮＧＰｌｅｕｒｏｔｕｓｅｒｎｉｉ） ｙｇ１０］
等［同样综合利用ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ技术对我国
国内的３２个刺芹侧耳栽培菌株进行遗传多样性
［１］评价，并聚为五类。Ｚ运用１ＨＡＮＧ等１１个
）ＩＳＳＲ引物对２０个金顶侧耳（Ｐ．ｃｉｔｒｉｎｏｉｌｅａｔｕｓｐ进行多样性分析，得到了８２．９１％的多态性。刘靖宇等和ＦＵ等均分别采用ＩＳＳＲ、ＲＡＰＤ和ＳＲＡＰ分子标记技术对供试香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ１２，１３］
。菌株的遗传多样性进行有效评价［ｅｄｏｄｅｓ）
１４］
而关于灰树花的报道，只有王守现等［采用酯酶
同工酶、ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ方法对北京地区的６个灰树花菌株进行分类综合分析。
本试验采用１６个ＩＳＳＲ引物和１９个ＲＡＰＤ引物对灰树花菌株Ｄ研究结果表ＮＡ进行扩增，明，ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ技术均能分析灰树花菌株的多样性，多态性较高，两种标记的单独使用和综合使用都能将８株菌株区分开，但分类结果略有差异。分析结果表明，供试菌株Ｇｆ４、Ｇｆ５、Ｇｆ１、－－－可为今后灰树花选Ｇｆ２和Ｇｆ３间亲缘关系较远，－－育工作选择亲本材料提供有效的参考。
参考文献
［］黄年来，林志彬，陈国良．中国食药用菌学［１Ｍ］．上
海：上海科学技术文献出版社，２０１０：７７０７８６．－［］吕作舟．食用菌栽培学［２Ｍ］．北京：高等教育出版社，
２００６：２７２２７８．－ｃｉｔｒｉｎｏｉｌｅａｔｕｓＳｉｎｅｒｃｕｌｔｉｖａｒｓｕｓｉｎｔｗｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｇｐ ｍａｒｋｅｒｓｔｅｍｓ ｓｙ
（ＩＳＳＲｓｎｄＲＡＰｓ）ａｎｄ ａ Ｓ
ｍｏｒｈｏｌｏｉｃａｌｒａｉｔｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄｉｃｒｏｂｉｏｌ ｔ Ｊ Ｍｐｇ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２０１２，２８：２２３７２２４８．－［］刘靖宇，宋秀高，叶夏，等．香菇菌株遗传多样性１２
］食用菌学报，ＩＳＳＲ、ＲＡＰＤ和ＳＲＡＰ综合分析［Ｊ．（）：２０１１，１８３１８．－［］１３ＦＵＬＺ，ＺＨＡＮＧ ＨＹ，ＷＵ ＸＱ，ｅｔａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｅｎｅｔｉｃｏｆｄｉｖｅｒｓｉｔｉｎＬｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓｓｔｒａｉｎｓｕｓｉｎ ｇｙｇ ＲＡＰＤ，ＩＳＳＲａｎｄＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪ ，（）：ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２０１０，２６４７０９７１６． －［］王守现，刘宇，张英春，等．六个灰树花菌株遗传多１４
］样性分析［Ｊ．北方园艺，２０１０，１：２０１２０４．－第４期王春晖，等：基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的八株灰树花栽培菌株遗传多样性分析
５
ＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｆＥｉｈｔＧｒｉｏｌａｒｏｎｄｏｓａ ｆｆｙｏｇ
ＣｕｌｔｉｖａｒｓＡｎａｌｚｅｄＵｓｉｎＳＳＲａｎｄＲＡＰＤ Ｍａｒｋｅｒｓ ｙｇＩ
＊
，Ｙ，ＷＡＮＧＣｈｕｎｈｕｉＩＮ ＹｏｎａｎＲｕｘｉａｏＰＥＮＧ Ｙｕｎｘｉａｎ ｇｇｇ，ＨＵ ｇ
（，，）ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｕｎａｎＥｄｉｂｌｅＦｕｎｉＣｈａｎｓｈａＨｕｎａｎ４１００１３，Ｃｈｉｎａ ｇｇ
：ＧｒｏｎｄｏｓａＡｂｓｔｒａｃｔｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔａｍｏｎｅｉｈｔＧｒｉｏｌａｃｕｌｔｉｖａｒｓｆｒｏｍ ＢｅｉｉｎａｎｄＦｕｉａｎ，Ｚｈｅｉａｎａｎｄ ｆｆｙｇｇｊｇｊｊｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅｓａｓｎａｌｚｅｄｓｉｎｎｔｅｒｓｉｍｌｅｅｕｅｎｃｅｅｅａｔ（ＩＳＳＲ）ａｎｄａｎｄｏｍｌｍｌｉｆｉｅｄＨｕｎａｎ ｗ ａ ｕ－ ｓ ｒ ｒｙｇｐｑｐｙｐ ｉ ａｏｌｍｏｒｈｉｃＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ｍａｒｋｅｒｓ．ＳｉｘｔｅｅｎＩＳＳＲｒｉｍｅｒｓｅｎｅｒａｔｅｄａｔｏｔａｌｏｆ２１４ＤＮＡｂａｎｄｓｆｒｏｍｔｈｅ ｐｙｐｐｇ
ｅｉｈｔｃｕｌｔｉｖａｒｓｏｆｗｈｉｃｈ１９６（９１．６％）ｗｅｒｅｏｌｍｏｒｈｉｃ．ＮｉｎｅｔｅｅｎＲＡＰＤｒｉｍｅｒｓｅｎｅｒａｔｅｄａｔｏｔａｌｏｆ２６５ ｇｐｙｐｐｇｏｌｍｏｒｈｉｃ．ＧｅｎｅｔｉｃＤＮＡｂａｎｄｓｆｒｏｍｔｈｅｅｉｈｔｃｕｌｔｉｖａｒｓｏｆｗｈｉｃｈ２３８（８９．８％）ｗｅｒｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｐｙｐｇｙ
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ｒｏｎｄｏｓａｒｅｒｅｓｅｎｔｓｕｅｒｉｏｒＧ．ｂｒｅｅｄｉｎｓｔｏｃｋ． ｆｐｐｇ
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［本文编辑］ 于荣利
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