复方尿囊素乳膏中尿囊素的含量测定

维普资讯 http://www.cqvip.com 药物鉴定　复方尿囊素乳膏中尿囊素的含量测定　２００８年第ｌ７卷第１期　汤晟凌，兰海娟，邹慧龙　（浙江省丽水市人民医院，浙江丽水３２３０００）　摘要：目的建立复方尿囊素乳膏中尿囊素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法，色谱柱为ＺｏｒｂａｘＮＨ：柱，流动相为甲醇一　水（８０：２０），流速为１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２２４　ｎｍ。结果尿囊素质量浓度线性范围为１８７．６８—９３８．４０　ｇ／ｍＬ，ｒ＝０．９９９　９５，平均回收　率为９９．９０％，ＲＳＤ＝１．９２％（ｎ＝９）。结论该方法专属性强，结果准确可靠，能很好地控制制剂质量。　关键词：尿囊素；含量测定；高效液相色谱法　中图分类号：１１９２７。２；Ｒ９８６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２００８）０１—００２２—０２　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉＯｎ　０ｆ　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　ｉｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　Ｃｒｅａｍ　Ｓｈｅｎｇｌｉｎｇ，Ｌａｎ　Ｈａｉｊｕａｎ，Ｚｏｕ　Ｈｕｉｌｏｎｇ　ｆ　Ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｌｉｓｈｕｉ　Ｃｉｔｙ，Ｌｉｓｈｕｉ，Ｚｈｅｉｆａｎｇ，Ｃｈｉｎａ　３２３０００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｌａｎｔｏｉｎ　ｉｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　Ｃｒｅａｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｌｌａａｎｔｏｉｎ　Ｗ８８　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｚｏｒｂａｘ—ＮＨ２　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ：ｗａｔｅｒ＝８０：２０　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　Ｗ８８　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２２４　ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ａｌｌａｎｔｏｉｎ　ｗａｓ　ｆｒｏｍ　１　８７．６８　ｇ／ｍＬ　ｔｏ　９３８．４０　ｇ／ｍＬ，ｒ＝　０．９９９　９５，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９９．９０％，ＲＳＤ＝１．９２％（／７，＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｈｏｄ　ｉｔｓ　ｓｐｅｃｉａｌ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｌａｎｔｏｉｎ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｖｅｒｙ　ｗｅｌｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｃｒｅａｍ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｌｌａｎｔｏｉｎ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｉｎ；ＨＰＬＣ　按供试品溶液制备方法制备　表１　尿囊素回收率试验（　：９）　待测溶液。精密吸取２０　ＩＬＬ，注　－　—　■　入液相色谱仪，测定峰面积，计　（Ｉ￣ｇ／ｍＬ）（￣，ｇ／ｍＬ）　（％）　（％）（％）　算样品中尿囊素（Ｃ４Ｈ６Ｎ４０３）的　３２７．３６　３３０．０５　１００．８２　含量。结果见表１。　３２７．３６　３２９．９６　１００．７９　稳定性试验：在４　ｈ内考　３２７・３６　３３６・９２　１０２・９２　察样品稳定性。精密称取本　０９・２０　４１５・０５　ｌ０ｌ・４３　院制剂室制备的批号为４０９・２０　４１０・　８　００・３　９９・９０　・９２　２００６１２１８的复方尿囊素乳膏　０９・２０　４０９．０５　９９．９６　１．００７　３　ｇ，按供试品溶液制　９　・０　８・０６　９　・３６　备方法　备待测溶液，精密吸４９１．０４　４７８．１６　・。　最２０　Ｌ，注入液相色谱仪，测一兰　．＿　坠旦—　９＿——一　定峰面积，计算样品含量。结果的ＲＳＤ＝１．０６％（ｎ＝８），表明溶液　在４　ｈ内稳定。　重现性试验：精密称取尿囊素对照品２３．４６　ｍｇ，置５０　ｍＬ量瓶　中，加水１０ｍＬ，加热使溶解，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，重　２．２　溶液制备　精密称取尿囊素对照品，加流动相　Ａ．　　．。。　复进样９次，测定峰面积。结果的ＲＳＤ＝０．５２％（ｎ＝９）。　２　４样品含量测定　三毒液　制成质量浓度为４００￣ｇ／ｍＬ的对照品　Ｂ．供试品溶液　溶液。精密称取复方尿囊素乳膏１　ｇ，置　图１　高效液相色谱图　５０ｍＬ量瓶中，加水１０　ｍＬ，加热使尿囊素充分溶解，加甲醇适量，　放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，置冰浴中冷却２　ｈ以上，取出，迅　速用微孔滤膜（０．４５　ｌＩ肌）滤过，取续滤液放至室温，作为供试品溶液。　２．３方法学考察　线性关系考察：精密称取尿囊素对照品４６９．２　ｍｇ，置５０　ｍＬ量　精密吸取对照品溶液和供试品溶液各２０　，分别注入液相色　谱仪，测定峰面积，以外标法计算样品中尿囊素（Ｃ　Ｈ　Ｎ　０，）的含量。　结果批号为２００６１２２１，２００６１２１８，２００６１２０４的３批样品中尿囊素　相对百分含量分别为１．８７％，２．０１％，１．９０％（ｎ：２）。　３讨论　复方尿囊素乳膏是我院自行配制的皮肤科外用制剂，因其中　的尿囊素具有增加皮肤角质层水合作用，能促使细胞代谢、生长，　促进损伤组织愈合，故对皮肤干燥、皲裂疗效显著。　笔者查阅了关于尿囊素的检测文献。检测方法有紫外分光光　度法…、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法等，最后参考文献［２】的方法，取　瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，依次量取该溶液１．０，２．０，　３．０，５．０，１０．０　ｍＬ，分置５０　ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后　分别精密吸取２０　Ｌ，注入液相色谱仪中，记录色谱图，并以质量浓　度（Ｃ）对峰面积（Ａ）进行线性回归，得回归方程Ａ＝８．２１１　０４Ｃ＋　得较满意的分离效果。根据文献提示，以甲醇一水（８０：２０）为流　动相，不仅分离效果较好，且出峰时间也好。笔者曾根据文献［３】以　０．０３　ｍｏｌ／Ｌ的磷酸二氢钾（ｐＨ＝７．０）一甲醇（６０：４０）为流动相，用　Ｃ　柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｌｎｌｎ，５　ｍ）分离该制剂的尿囊素，结果尿囊素　１９．６３４　４４，ｒ＝Ｏ．９９９　９５，可见尿囊素质量浓度在１８７．６８—９３８．４０￣ｇ／ｍＬ　范围内与峰面积线性关系良好。　回收率试验：以绝对回收率表示，测定高、中、低３个质量浓度　的样品。精密称取尿囊素对照品适量，加到缺尿囊素的空白样品中，’　在２　ｍｉｎ时出峰，可以说Ｃ。ｓ柱对尿囊素基本不保留，且尿囊素与　・２２・　中国药业Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年第１７卷第１期　盐酸替扎尼定口腔崩解片的含量和有关物质测定　药物鉴定　余莲　４０００６２）　（重庆市第五人民医院，重庆摘要：目的建立测定盐酸替扎尼定口腔崩解片中盐酸替扎尼定含量及其有关物质的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法。方法采用反相高效液相色　谱（ＲＰ—ＨＰＬＣ）法，以Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ。８柱（２５０　ｍｍ　ｘ４．６　ｍｍ，１０　Ｉｘｍ）为色谱柱，甲醇一３０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＨ２Ｐ０　溶液一三乙胺（１５：８５：０．８，磷酸调　节ｐＨ值至３．０±０．１）为流动相，检测波长３２０　ａｍ，流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为３０￣Ｃ；有关物质检查除检测波长为３００　ａｍ外，其他务件同含　量测定。结果盐酸替扎尼定质量浓度在１，０～１０．０　Ｉｘｇ／ｍＬ范围内与峰面积的线性关系良好（ｒ＝０．９９９　９），平均加样回收率为９９．１％～　９９，３％，ＲＳＤ为０．１２％　０．１５％；有关物质检查条件下检测限为０．０５　ｎｇ（Ｊｓ／Ｎ＝３），有关物质检查的限量为１，Ｏ％。结论所建立的方法　准确、简便，适用于盐酸替扎尼定Ｉ３＇腔崩解片的质量控制。　关键词：盐酸替扎尼定；反相高效液相色谱法；含量测定；有关物质　中图分类号：Ｒ９２７；Ｒ９７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２００８）０１—００２３—０２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　Ｏｒａｌｌｙ　Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ　Ｔａｂｌｅｔ　ｂｙ　ＲＰ—ＨＰＬＣ　Ｙｕ　Ｌｉａｎ　ｆＮｏ．５　Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ　４０００６２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＲＰ—ＨＰＬＣ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　Ｏｒｌｌａｙ　Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ　Ｔａｂｌｅｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＲＰ—ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ，Ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ，８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ｍｍ　ｘ　４．６　ｍｍ，　１０　Ｉｘｍ）ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｔ　３２０　ａｍ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ一３０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＨ２ＰＯ４　ｓｏｌｕｔｉｏｎ—ｔｒｉｅｔｈｙ—　ｌａｍｉｎｅ（１５：８５：０．８，ａｄｊｕｓｔｉｎｇ　ｐＨ　ｔｏ　３．０±０，１　ｗｉｔｈ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ）．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１，０　ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｅｒｅ　３０￣Ｃ；ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓａｍｅ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｅｘｃｅｐｔ　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｔ　３００　ａｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ（ｒ＝０，９９９　９）ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１，０—１０．０　Ｉｘｇ／ｍＬ　ｆｏｒ　ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｆｒｏｍ　９９，１％ｔｏ　９９．３％ｏｒ　ｔｈｒｅｅ　ｄｉｆｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ．ＲＳＤ　ｗａｓ　ｆｒｏｍ　０．１２％ｔｏ　０，１５％．Ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｌｉｍｉｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　ｗａｓ　０．０５　ｎｇ（Ｊｓ／Ｎ：３），Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｉｍｉｔ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｗａｓ　１．Ｏ％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ．ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　Ｏｒａｌｌｙ　Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ　Ｔａｂｌｅｔ　ａｎｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｉｔ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒ／ｄｅ　Ｏｒａｌｌｙ　Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ　Ｔａｂｌｅｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ；ＲＰ—ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　盐酸替扎尼定（ｔｉａｚａｎｉｄｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）适用于由脑外伤、脑　胺（１５：８５：０．８，磷酸调节ｐＨ值至３．０　－４０．１）；含量测定检测波　长：３２０　ａｍ；有关物质检查检测波长：３００　ａｍ；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱　炎等疾病所致的肌痉挛、肌强直和大脑麻痹等的治疗　１。目前其质　量控制方法尚未见报道，故笔者建立了替扎尼定口腔崩解片含量　测定及有关物质检查的反相高效液相色谱（ＲＰ—ＨＰＬＣ）法，现报道　如下。　温：３０￣Ｃ。理论塔板数按替扎尼定峰计算应不低于３　５００。主成分峰　与相邻杂质峰的分离度应大于１．５。　２．２含量测定　２．２．１测定法　１仪器与试药　高效液相色谱仪：包括日本岛津ＬＣ一１０ＡＴｖｐ泵，ＳＰＤ一１０Ａｖｐ　型紫外检测器，ＣＴＯ一２Ａ型柱恒温箱；美国ＡＬＬＥＣＨ公司ＳａｇｅＤａｔａ　Ｓｙｓｔｅｍ色谱工作站；Ｒｈｅｏｄｙｎｅ　７７２５ｉ型液相色谱进样器（美国）。盐　酸替扎尼定对照品（批号为０４０１０２，含量为９９．９１％）；替扎尼定口　取本品１Ｏ片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于替扎　尼定５　ｍｇ），置１００　ｍＬ量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。摇匀，　滤过，精密量取续滤液５　ｍＬ，置５０　ｍＬ量瓶中，加流动相至刻度，摇　匀，作为供试品溶液；另取盐酸替扎尼定对照品适量，加流动相制　成每１　ｍＬ含替扎尼定５　Ｉｘｇ的溶液，作为对照品溶液；取供试品和　腔崩解片（由某药业公司提供，规格为２　ｍｇ／片，批号为０４０５０１，　０４０５０２，０４０５０３）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。　２方法与结果　对照品溶液各２Ｏ　，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算　出供试品中替扎尼定（Ｃ　Ｈ。Ｃ１Ｎ　Ｓ）的含量。　２．２．２方法学考察　专属性考察：供试品溶液、对照品溶液和空白辅料溶液的色谱　２．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ－８柱（２５０　ｍｍ　ｘ４．６　ｍｍ，１０　Ｉｘｍ，大连依利特　科学仪器有限公司）；流动相：甲醇一３０　ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠一三乙　甲醇溶剂同时出峰，干扰很大。试验中发现，系统适用性试验结果不　图见图１。可见，流动相、辅料在盐酸替扎尼定峰处无干扰，盐酸替　素的含量［Ｊ】．安徽医科大学学报，２０００，３５（６）：１１２—１１３．　【２】周心如，曹京宜．山药中尿囊素的高效液相色谱分析方法研究【Ｊ】．色　谱，１９９６，１４（２）：１２９—１３１．　同，尿囊素的峰面积相差很大，所以使用外标法测定尿囊素含量。　ＨＰＬＣ法测定复方尿囊素乳膏稳定、准确、可靠，可用于本制　剂的含量控制。　［３】周月红，王蔚．复方尿囊素乳膏的制备及含量测定［Ｊ】．中国药师，　参考文献：　［１　１姜玲，施明德，谢东梅．紫外分光光度法测定复方尿囊素乳膏中尿囊　２００３，６（３）：１５３～１５４．　（收稿日期：２Ｏｏ７一Ｏ３—２２；修回日期：２００７—０７—１２）　・中国药业Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　２３・